BMSC腺病毒感染

liukuantj

各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。
( u% f& L' h% \7 @5 X" i" j. V) [1，我查了文献，大概腺病毒转染Rabbit的MOI大概在200左右，那呢也就是说，我转染一个T25培养瓶（细胞量约为50万个细胞）的话，需要的病毒颗粒是一亿个病毒活性颗粒，我的GFP腺病毒浓度是1*10e11/ml,那么也就是只需要1ul就够了。我想问下，这1ul的病毒液该如何加入到培养基中，是直接加进去，还是先跟培养基预混后再加入。
9 M  J2 ?; t- R+ {% c3 @; Y2，一般转染的时间要多久？我上次大概转了24h，可是3天后，荧光依然是很弱。: p$ [! b9 p# @0 ?
3，是否需要添加prolygrene?怎么加？* o+ o0 M- P! r* l
4，病毒如何分装比较好，是直接分转成小包装，还是预混培养基后再分装？$ N+ M. w' z" g; B. G- g, [( I
谢谢！

liukuantj

liukuantj 发表于 2014-10-30 20:43
3 G/ H5 `8 C1 b1 [  ^各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。
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9 Q5 S0 c9 V! v& v3 H谢谢前辈，不知病毒液该如何分装，单独分装，还是跟培养基预混后再分装？我可以吧polybrene一块先和病毒液，以及培养基一块混合后，在分装-80保存？谢谢！