BMSC腺病毒感染

liukuantj

各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。5 R- D# x. h$ o7 G
1，我查了文献，大概腺病毒转染Rabbit的MOI大概在200左右，那呢也就是说，我转染一个T25培养瓶（细胞量约为50万个细胞）的话，需要的病毒颗粒是一亿个病毒活性颗粒，我的GFP腺病毒浓度是1*10e11/ml,那么也就是只需要1ul就够了。我想问下，这1ul的病毒液该如何加入到培养基中，是直接加进去，还是先跟培养基预混后再加入。0 I5 _$ U. C5 i( n6 ]" E6 A& z% y
2，一般转染的时间要多久？我上次大概转了24h，可是3天后，荧光依然是很弱。9 S) w7 v- E- Q" H: l) K, @: q
3，是否需要添加prolygrene?怎么加？
( G, \( _; r0 Z- y4，病毒如何分装比较好，是直接分转成小包装，还是预混培养基后再分装？0 m" d: }$ J9 M) ?0 B! q. f+ m
谢谢！

liukuantj

liukuantj 发表于 2014-10-30 20:43
9 X1 a7 z2 o7 @0 Q" b各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。
8 Q+ W5 V3 u# B8 x1，我查了文献 ...

/ p  [" a" B9 n8 b
谢谢前辈，不知病毒液该如何分装，单独分装，还是跟培养基预混后再分装？我可以吧polybrene一块先和病毒液，以及培养基一块混合后，在分装-80保存？谢谢！