BMSC腺病毒感染

liukuantj

各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。
7 M6 C4 v" |+ r1，我查了文献，大概腺病毒转染Rabbit的MOI大概在200左右，那呢也就是说，我转染一个T25培养瓶（细胞量约为50万个细胞）的话，需要的病毒颗粒是一亿个病毒活性颗粒，我的GFP腺病毒浓度是1*10e11/ml,那么也就是只需要1ul就够了。我想问下，这1ul的病毒液该如何加入到培养基中，是直接加进去，还是先跟培养基预混后再加入。) A3 d* F. `6 v( }: D. k# O
2，一般转染的时间要多久？我上次大概转了24h，可是3天后，荧光依然是很弱。
6 [7 u5 Q$ i0 W- S9 O0 D3，是否需要添加prolygrene?怎么加？  y( U* ]5 Y  g2 n9 r' k
4，病毒如何分装比较好，是直接分转成小包装，还是预混培养基后再分装？
( X: ~  }1 T+ H- W$ k4 K谢谢！

三木一叶

回复 liukuantj 的帖子
9 S7 e+ F# F4 t2 x1 S+ r7 N$ h6 [% Z- I/ I6 [. M# {7 R$ h5 w" x
直接分装就可以了啊，不推荐加其他东西预混后分装，因为万一你还要用这个病毒做其他类型的细胞转染呢？
* r; g2 y& L& ~+ c( \3 O
$ M! s8 I1 ?) Q( C7 m3 O我最近在做干细胞的转染，好难转啊

liukuantj

liukuantj 发表于 2014-10-30 20:43
9 w7 W- @/ C* `各位前辈，我目前正在做GFP腺病毒转染兔的骨髓间充质肝细胞，有几个问题想请教下各位前辈。% ]) @& D- }% {# C8 X; _4 H: `: v
1，我查了文献 ...

7 S' B( X9 m. F2 c& y3 \7 p' k谢谢前辈，不知病毒液该如何分装，单独分装，还是跟培养基预混后再分装？我可以吧polybrene一块先和病毒液，以及培养基一块混合后，在分装-80保存？谢谢！

luyue6453

回复 liukuantj 的帖子
* u0 v" e+ m/ z2 U; I' k! R% _# J3 \7 z: T
你如果怕1ul不好加，可以把病毒用培养液稀释10倍然后加10ul这样啊，这有什么好纠结的，再一个，不同细胞病毒感染能力都不同，你需要做预实验的，分别几个浓度，几个转让时间测一下，然后才能确定你的最佳操作。