石蜡切片之HE染色与免疫荧光

yeshch

本人近来石蜡切片一直做不好，出现以下问题不知为何或者没有找到解决方案，还望有经验的家友多多指点。问题如下：$ m0 s( ~; \" t. e, H, G/ D3 N
1、材料由4%PFA固定，包埋之前自从脱水开始便皱缩，一直持续到浸蜡完成也未得到缓解。
1 J3 {$ V# Y2 J2、HE染完色之后用清水冲洗时很容易褪色，基本染不上，不知为何，怎样调整染色时间和水洗时间都染不好；
1 \: S4 n8 Q+ y& w9 b6 s3、材料在操作过程中很容易脱离载玻片，使得材料表面不平整，容易残留液体。- L( X" k. \! r# n( @, Q* \
4、免疫荧光封闭液用5%BSA取代影响大吗？一抗染的时间久一些没关系吧？显微镜下观察时材料总是不清晰，聚焦很模糊，感觉不在一个层面上（切得4um）

yeshch

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四度过夜不是一抗吗？你们封闭过夜？

yeshch

回复 moluxingke 的帖子2 ?! s" E) a8 d) k# Q/ P0 x. Z& p

: ~# i8 V7 U& K3 R6 u& Y! c非常感谢你的回复！还有疑问：固定过久会皱缩？我的材料是脱水后皱缩的；按道理应该二甲苯透明后就该恢复了，至少浸完蜡也该不皱缩了吧？伊红问题不大，主要是苏木精返蓝后褪色比较严重，导致染色很浅；你们伊红染过不用95%脱色吗？其他的我再改进一下吧，多谢咯！

yeshch

回复 moluxingke 的帖子/ l- c+ O9 f0 n; C- T. D

! `4 V# Z6 ?/ t0 h; k  D受教了，可是别人说他们的组织脱水皱缩经过后面的步骤又变的坚挺了

yeshch

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' p6 A* R# h4 `$ [# m% q7 ~: d+ w80度？！我们都是62度，或者37度过夜

yeshch

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' x8 j3 L0 l; {+ `" m* e下次试试，但是烤片实在有点不理解。thanks！