石蜡切片之HE染色与免疫荧光

moluxingke

回答：1 材料容易皱缩原因可能是因为组织本来含水多，脱水后皱缩，也有是固定过久，还有就是脱水过程时间没有控制好。
# W9 W3 N6 w2 M* m! a8 q      2 HE染色退色一般是伊红容易退色，而苏木素用自来水洗涤的时候容易变得较蓝一些。伊红退色有可能是伊红用太久了，换新的，或是你伊红染过之后就不要冲洗了，直接在100%的酒精中洗涤过，然后二甲苯洗涤 封片。' S& [9 H* A' P. _/ {+ C, l
3 材料脱离载玻片？不是太明白你的意思，一般来说，载玻片需要预先处理过的，比如多聚赖氨酸，主要是用来防止组织脱片的。5 b2 r2 j7 j8 ~
4 可以用BSA代替，一抗连接太久容易出现背景色，尤其是石蜡切片做免疫组化的时候。
  ?/ K' R8 f+ \- p( _) A5 聚焦模糊，不在一个焦面上原因可能是你的切片没有贴好，组织本来就不在一个面上，另外就是你封片的时候，封片剂没有涂匀，建议是封片后，用镊子稍微夹一下，使载玻片和盖玻片之间的距离尽量均匀一些，8 q1 ~' e1 F  [( ^
不知道有没有回答好你的疑问。

moluxingke

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! S. @1 j4 R- J5 b/ G; R6 B4 k组织脱水皱缩后很难恢复的，二甲苯主要是把酒精替换下来，浸完蜡也只是替换一下二甲苯，组织丢失的水分不会回来了。苏木素褪色？我很少遇见，我碰到的情况都是苏木素然后之后，自来水反蓝，会变得更蓝，没有见过褪色，所以我不知道是不是你苏木素有问题，或者说你苏木素染色过后，酸乙醇分色太久了，导致褪色严重，如果是这种情况，那你酸乙醇分色时间稍短一点。
0 b; b: D& ?! D8 U! X3 T4 m( U伊红好像本来就是溶解在95%酒精里面的，我们就把伊红当成95%酒精脱水了，后面再加一道95%酒精，如果觉得伊红染色过重，就在95%酒精里面多放一会，否则时间就短一点。

moluxingke

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: K! o. B. d: O' I. b
- J4 C# I* c4 f3 w不好意思，这个就不清楚了，可能和组织有关，也可能他们有“诀窍”，呵呵，我处理的组织经过这些程序后都会变小一点儿。