请教下关于胶原酶的问题 - 实验室综合讨论区干细胞之家



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小小研究员

楼主

发表于 2014-11-26 20:38 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

请教下论坛里的各位老师胶原酶一般用什么溶解和稀释；用来消化像脐带胎盘组织的一般用什么浓度，消化组织的比例是多少的啊，消化后的组织呈什么状，还是直接消化没了？？？谢谢了

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沙发

发表于 2014-11-27 07:35 |只看该作者

我们是用PBS配制的0.1%或0.075%消化过胎盘组织。其他组的也用过培养基DMEM配过。

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yeshch

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藤椅

发表于 2014-11-27 19:05 |只看该作者

我们的胶原酶是用F12稀释十倍的，其他的不清楚

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zuming

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板凳

发表于 2014-11-28 10:33 |只看该作者

用PBS或者F12稀释到0.1%。9 f2 ~9 [1 {" B8 k+ a
消化时间控制比较关键，这个我们这不同的人时间拿捏上稍有区别。

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喜羊羊

新手上路

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报纸

发表于 2014-12-5 08:56 |只看该作者

胶原酶的配置
胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制、消毒灭菌和储藏。　　注意：　　因为Ⅰ型胶原酶分子颗粒比胰酶大，不容易过滤，因此可以用蔡式滤器过滤除菌。　　钙、镁离子和血清成分不会影响胶原酶的消化作用，因而可用BSS（如D-hanks或者PBS）或含血清的培养液配制。( n: e( `7 g) K7 R8 `
常用剂量为最终浓度200U/ml（约为1mg/mL）或0.03%~0.3%。

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绿茶@

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地板

发表于 2014-12-5 09:18 |只看该作者

不知道你用的是哪一种胶原酶，我一般用的是Ⅳ型胶原酶，习惯用DMEM配制，楼上说的用PBS、DF12等估计也没有问题，一般需要过滤除菌，胶原酶一般是通过稀释终止消化的。我消化干细胞时通常配制成10×（10mg/ml）的储存液，做Feeder（消化的是组织块）时用的浓度就会高一些，一般用的是5mg/ml，如果消化的是脐带胎盘组织的话，浓度估计会差不多，或者可能要稍高一些，你可以做个梯度试一下