脐带间充质干细胞爬不出来，求教！

chslyx

这段时间做的脐带都爬不出来细胞，请教一下原因# R# Z1 \4 k: t5 W, r
1、剪下来的脐带放在装有PBS（8万UI庆大）的瓶子里面通过血液运输箱拿回来，运输过程两小时左右{刚开始我以为PBS里面加的是双抗，后面问的装PBS的人才知道加的是庆大}
: |" q  d# ^" _2 m2、清洗：PBS----75%酒精一分钟------PBS----PBS
9 s+ q/ ~# Z. |3、撕下动静脉，羊膜，剪碎，大约一小时（15cm脐带）
/ G) r$ O  j, Q' t# [4、铺皿，用的是下面的培养基+12%FBS+20ng/mlEGF
# q* s+ ?2 j  |) H6 r  Y( ]  B37摄氏度，5%CO2培养
/ O4 X9 O0 E1 _& y2 I$ N: o# L好几条都十多天还是没有出来细胞，请各位老师帮忙分析一下  i  r! U$ J. c5 e8 ~2 r6 h

3 t  s1 X* u' S8 N. M) E' a

yaolinzhang

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/ t  M' h4 k* T7 p; n6 I2 h% `& a
% y* _' V+ F3 m/ i# |- e. k1.运输时最好用培养基，尽量缩短时间；
* k( g2 [2 s' J0 o! @+ N$ ?2.用含双抗的PBS洗三遍即可，无需用75%的乙醇；' }$ e1 }5 y. q9 W2 X9 {/ y  a$ G
3.可以试试DMEM低糖培养基。
$ H3 Z* _6 U$ b注：尽量缩短组织及细胞在外界的暴露时间，祝好运

qiaozhong.9876

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$ ?1 P4 [+ d: o6 i1.运输时最好用加了双抗的M液，尽量把时间控制在48小时之内
( z9 c8 d3 ~7 ?0 n5 n2.操作过程没有多大问题，就是看你的图片，你剪的组织块比较大，剪的特别碎，最好是肉末状，整齐排在皿里，或者你用T75培养瓶养6 A# I5 e9 c/ \" S3 f; d# T
3.把血清浓度调大按5:1的比例加
! w3 F, B7 i9 G: O. _: Y4.养脐带间充质干细胞加bFGF这种生长因子效果会更好
: V0 r' p7 p+ R0 L6 M2 L5.你的培养基里应该再加一些丙酮酸钠

qiaozhong.9876

回复 qiaozhong.9876 的帖子1 @# f3 f1 o% H. p
& @# ~; D3 n8 }$ _7 k
还有一点就是不知道你的血清是国产的还是进口的，用的是什么牌子的？( J) q5 x" @3 N4 ?

chslyx

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+ s) U& r5 l5 J0 Z+ A: X0 O& i& ]6 _. D2 c3 b+ Y
血清是gibco的，进口的

chslyx

回复 yaolinzhang 的帖子! z/ w6 N3 l# {1 |" g
2 M/ ~5 _2 ?2 J5 B
运输时用培养基，那培养基里面要加血清和双抗吗？

yaolinzhang

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& e2 C% q  l' M2 Y+ M% E5 q) G% |) c6 a, Q2 z/ c1 x
不用加血清，但要加双抗

听不到

我是觉得你剪碎的组织块排列的太密了，细胞没有空间长了。还有用乙醇处理我觉得对细胞也是有伤害的。不过我运输的时候整过直接就放在标本袋里，然后放在冰盒里带回来，然后用加双抗的PBS各种洗，也还挺好的，所以我不认为是你运输时使用液体的问题，不过得快，我基本都是在4个小时之内，一般2个小时就拿到操作了

chslyx

回复 听不到 的帖子) E. V8 g# }" v- ]( q

& E: |8 k0 Z5 j( |如果像我拍的那个培养皿的组织块的量，我可以分成两皿吗？

a52602589

第一 组织块太密集: U. }9 \7 m' K8 k7 o8 I8 T/ {7 l
第二 建议更换培养瓶
  s# i( {# V/ z9 ^; R; f  c第三 看培养基颜色太淡 是否加入培养基过少