脐带间充质干细胞爬不出来，求教！

chslyx

这段时间做的脐带都爬不出来细胞，请教一下原因9 Z4 n" r" B1 b% Y
1、剪下来的脐带放在装有PBS（8万UI庆大）的瓶子里面通过血液运输箱拿回来，运输过程两小时左右{刚开始我以为PBS里面加的是双抗，后面问的装PBS的人才知道加的是庆大}
, v# p6 x4 c/ W  I: n2、清洗：PBS----75%酒精一分钟------PBS----PBS
, @7 v, f+ C! o3 t3、撕下动静脉，羊膜，剪碎，大约一小时（15cm脐带）
9 H. n1 s) b0 p% j2 x! I9 i4、铺皿，用的是下面的培养基+12%FBS+20ng/mlEGF
9 i4 q. t6 l. x: a; m37摄氏度，5%CO2培养5 S( R/ O' J; L, J1 g4 |- c
好几条都十多天还是没有出来细胞，请各位老师帮忙分析一下% p% i- B/ i3 z( L
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yaolinzhang

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7 A: _; [0 z. c' y: j
1.运输时最好用培养基，尽量缩短时间；! X9 \$ j& c& z4 P3 T
2.用含双抗的PBS洗三遍即可，无需用75%的乙醇；$ i. t9 G- J/ r- E* o
3.可以试试DMEM低糖培养基。# l1 ^( Z# L3 x
注：尽量缩短组织及细胞在外界的暴露时间，祝好运

qiaozhong.9876

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  @: l' ~' H; n) K0 q3 z% e" K. P2 d% W& _( u' y
1.运输时最好用加了双抗的M液，尽量把时间控制在48小时之内# B/ @" X, A' p" G
2.操作过程没有多大问题，就是看你的图片，你剪的组织块比较大，剪的特别碎，最好是肉末状，整齐排在皿里，或者你用T75培养瓶养
( f7 u( n/ C* v' s3.把血清浓度调大按5:1的比例加
. M' v4 W7 i" F6 \: }0 V$ i( E  W4.养脐带间充质干细胞加bFGF这种生长因子效果会更好
8 W9 G0 N2 @1 r7 O( v5.你的培养基里应该再加一些丙酮酸钠

qiaozhong.9876

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+ \, J; C% X# v* W% S# x4 Z
还有一点就是不知道你的血清是国产的还是进口的，用的是什么牌子的？- }- e0 ^: p- Y& [( u( I

chslyx

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; E0 R2 o. j" z3 l$ a7 a% @9 u0 h, P2 r7 Z* {7 _6 G( V9 x7 c0 F5 [
血清是gibco的，进口的

chslyx

回复 yaolinzhang 的帖子% ]" j3 W7 B  ?& X
; u$ ^% o0 y# E  Y
运输时用培养基，那培养基里面要加血清和双抗吗？

yaolinzhang

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不用加血清，但要加双抗

听不到

我是觉得你剪碎的组织块排列的太密了，细胞没有空间长了。还有用乙醇处理我觉得对细胞也是有伤害的。不过我运输的时候整过直接就放在标本袋里，然后放在冰盒里带回来，然后用加双抗的PBS各种洗，也还挺好的，所以我不认为是你运输时使用液体的问题，不过得快，我基本都是在4个小时之内，一般2个小时就拿到操作了

chslyx

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如果像我拍的那个培养皿的组织块的量，我可以分成两皿吗？

a52602589

第一 组织块太密集
1 E0 K. Y+ o: e' X. D$ M第二 建议更换培养瓶
- [! W$ C' M- C; }第三 看培养基颜色太淡 是否加入培养基过少