脐带间充质干细胞爬不出来，求教！

chslyx

这段时间做的脐带都爬不出来细胞，请教一下原因
; _/ @$ f! |+ M* Q$ p) x! o5 `1、剪下来的脐带放在装有PBS（8万UI庆大）的瓶子里面通过血液运输箱拿回来，运输过程两小时左右{刚开始我以为PBS里面加的是双抗，后面问的装PBS的人才知道加的是庆大}2 h8 D% ?9 [2 g" T; {
2、清洗：PBS----75%酒精一分钟------PBS----PBS
5 [3 p/ y- a" e% o. y& r' @; ]3、撕下动静脉，羊膜，剪碎，大约一小时（15cm脐带）9 K/ j0 z, F  G% a6 w' }
4、铺皿，用的是下面的培养基+12%FBS+20ng/mlEGF) C. t( |. H' m2 Y4 D) V
37摄氏度，5%CO2培养
+ e6 q; y( Y+ J8 ^3 T好几条都十多天还是没有出来细胞，请各位老师帮忙分析一下
" Q' ~7 X6 P# E* f3 \4 |9 d% E: I+ u. R: N3 }" b

yaolinzhang

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1 ]. }' d5 h* @0 N1 d2 F& l6 S! F1.运输时最好用培养基，尽量缩短时间；0 }" s1 S; F) j
2.用含双抗的PBS洗三遍即可，无需用75%的乙醇；  {; D2 B7 K# r9 H
3.可以试试DMEM低糖培养基。
" U7 Q: D2 q+ o# b5 q4 H* ]0 T" o: Y注：尽量缩短组织及细胞在外界的暴露时间，祝好运

qiaozhong.9876

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6 W( j) E3 T% c7 e" U" }# P. X4 m& ~$ _6 q& h
1.运输时最好用加了双抗的M液，尽量把时间控制在48小时之内
8 [6 {) b9 v5 q2.操作过程没有多大问题，就是看你的图片，你剪的组织块比较大，剪的特别碎，最好是肉末状，整齐排在皿里，或者你用T75培养瓶养
  U8 }& M8 o; D1 W8 t+ t& j* S3.把血清浓度调大按5:1的比例加/ G1 d8 G; V/ f+ F
4.养脐带间充质干细胞加bFGF这种生长因子效果会更好4 ~9 W  N4 q$ a) h* _* W
5.你的培养基里应该再加一些丙酮酸钠

qiaozhong.9876

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2 D/ ~0 F8 ?& l, g7 ~
+ N) B) @8 |" l1 |+ \还有一点就是不知道你的血清是国产的还是进口的，用的是什么牌子的？
) g; W* S! j7 E$ a# w  b( A$ d

chslyx

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) H! F- T: h8 }, O, q5 d
0 X8 u, }1 _# i5 V" Y血清是gibco的，进口的

chslyx

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8 V" M+ Z7 s$ U* Z, b8 c: S/ r/ C) {* H# e# F  e
运输时用培养基，那培养基里面要加血清和双抗吗？

yaolinzhang

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. @& x  y9 M3 Z, |$ K- F1 f* ?9 Z" n( S& i# h7 {+ h8 y7 T/ }9 Y
不用加血清，但要加双抗

听不到

我是觉得你剪碎的组织块排列的太密了，细胞没有空间长了。还有用乙醇处理我觉得对细胞也是有伤害的。不过我运输的时候整过直接就放在标本袋里，然后放在冰盒里带回来，然后用加双抗的PBS各种洗，也还挺好的，所以我不认为是你运输时使用液体的问题，不过得快，我基本都是在4个小时之内，一般2个小时就拿到操作了

chslyx

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! x% a  k6 I! ^( D$ M如果像我拍的那个培养皿的组织块的量，我可以分成两皿吗？

a52602589

第一 组织块太密集
! M. \' _/ d4 V2 k+ a4 l第二 建议更换培养瓶
& J% r0 A/ }- M* b; C: n4 u第三 看培养基颜色太淡 是否加入培养基过少