脐带间充质干细胞爬不出来，求教！

chslyx

这段时间做的脐带都爬不出来细胞，请教一下原因7 r( W' @: Y3 F$ y
1、剪下来的脐带放在装有PBS（8万UI庆大）的瓶子里面通过血液运输箱拿回来，运输过程两小时左右{刚开始我以为PBS里面加的是双抗，后面问的装PBS的人才知道加的是庆大}
9 o' f) I, ~9 p1 E' e9 z2、清洗：PBS----75%酒精一分钟------PBS----PBS7 j: p2 W5 ^$ V6 y* M
3、撕下动静脉，羊膜，剪碎，大约一小时（15cm脐带）6 J) r! Q  D$ f/ U
4、铺皿，用的是下面的培养基+12%FBS+20ng/mlEGF6 ~7 }5 U% L+ i4 \  |+ v
37摄氏度，5%CO2培养0 v; L# i! ^$ r# i& p1 {% Y4 V
好几条都十多天还是没有出来细胞，请各位老师帮忙分析一下
( }; b, \: C* K$ v
. u9 u8 `/ X$ v- \) ~; }/ K

yaolinzhang

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. k  j1 |# r/ k8 l
; N/ _  p( u& i$ ?- o% o6 ]2 ]6 x1.运输时最好用培养基，尽量缩短时间；
1 f) w+ w, V! T- v8 b& r2.用含双抗的PBS洗三遍即可，无需用75%的乙醇；1 A% e, \4 H; m7 `+ y
3.可以试试DMEM低糖培养基。7 i& l8 B3 f" L; |
注：尽量缩短组织及细胞在外界的暴露时间，祝好运

qiaozhong.9876

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% L: p" o4 f5 ^# M/ h1.运输时最好用加了双抗的M液，尽量把时间控制在48小时之内
5 B+ k" S7 [! `/ I2.操作过程没有多大问题，就是看你的图片，你剪的组织块比较大，剪的特别碎，最好是肉末状，整齐排在皿里，或者你用T75培养瓶养
+ a9 w+ C. N$ i/ C2 f, ?3.把血清浓度调大按5:1的比例加1 p3 t7 {* _0 k# j; S
4.养脐带间充质干细胞加bFGF这种生长因子效果会更好. H1 n9 w/ w& s
5.你的培养基里应该再加一些丙酮酸钠

qiaozhong.9876

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7 l+ `6 ~: |! P% w
. d2 R! e5 @) L6 v还有一点就是不知道你的血清是国产的还是进口的，用的是什么牌子的？
/ b9 {" j$ ~! Q$ v* x

chslyx

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* i4 x- R/ _8 C* l* `2 F  M& E" C7 e+ o4 h: A( J" k
血清是gibco的，进口的

chslyx

回复 yaolinzhang 的帖子) L! i% i& U$ C! J

6 a0 K) b2 R* ]# r5 A运输时用培养基，那培养基里面要加血清和双抗吗？

yaolinzhang

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& z* P1 F8 j" h9 Y, \% C! X, S
9 g, {' M" z. S- I" F/ G不用加血清，但要加双抗

听不到

我是觉得你剪碎的组织块排列的太密了，细胞没有空间长了。还有用乙醇处理我觉得对细胞也是有伤害的。不过我运输的时候整过直接就放在标本袋里，然后放在冰盒里带回来，然后用加双抗的PBS各种洗，也还挺好的，所以我不认为是你运输时使用液体的问题，不过得快，我基本都是在4个小时之内，一般2个小时就拿到操作了

chslyx

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. e; w: L6 E: d9 M% n2 Z; \& t5 G8 z! G7 N) A$ i5 ?1 g
如果像我拍的那个培养皿的组织块的量，我可以分成两皿吗？

a52602589

第一 组织块太密集
7 v' p9 T5 E# w第二 建议更换培养瓶
2 ?4 M% j; J2 m: s2 p% D第三 看培养基颜色太淡 是否加入培养基过少