脐带间充质干细胞爬不出来，求教！

deshenglll

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" P" t* ]: x* k2 A3 j) E4 N你这皿里组织块也太多了吧。不用加抗生素。就酒精消毒一下没事的。我们还做过50几个小时的脐带。一点问题没有。你在好好的找一下原因。培养基别加太多。

水念人倦

几点建议：6 l1 i! N: d( I" c  A; I( S
1.脐带2-4小时之内冰盒内直接PBS+p/s就可以，不需要培养基，太浪费了；! J% Y9 [0 p, c/ z+ P6 R
2.DF-12/DMEM+10%FBS个人经验都可以；
) ?; l# ?+ V" ]1 ?4 v* v1 \7 I3.组织块铺的太慢了，建议加大间距；
. @, |$ Z" {% E* `$ E3 D4.从第一张图来看好像块没有贴住，这样很难爬细胞出来的；
0 u" a  d1 t# K7 Z' D. b5.建议换培养瓶，不容易污染，可以长期操作，足够把块慢慢铺开。% S) b2 Z1 e  t$ }' a
差不多就这些，祝楼主实验顺利！

jinhaifeng

酒精泡还是需要的，为了减少污染的几率，组织块的确是太多了，看你的照片养个5皿都不过分，一开始培养基少加点，基本盖没组织块就行，前面几天不要去晃动，到5天左右换下液，七八天就有细胞了

伊诺强

第一、酒精时间太长。第二、运输没必要用培养基，最好低温运输4小时内，越快越好。第三、加bFGF效果会很明显，第四、血清和因子浓度可以适当下调。

荷荷

个人认为存在以下两个问题：
2 \2 ^; Z) ?+ x( ]" W2 Y8 e. ?1 酒精浸泡时间过久。这一步可有可无，如果不放心的话，15s即可；
' }5 q: j4 a' _8 a- q2 铺平密度太大，以至于细胞没有生长空间。至少可以分成4皿。

791849046

1.基础培养基我感觉a-MEM比较好一些；
+ N5 i/ e$ Y1 X" ~1 E4 T( U! ~2.不用加双抗；+ b/ ~& R' Q' U! \7 c$ [- |) ~
3.我们用的是血清替代物SR

chenchunlei

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, k9 {5 D8 H6 Y0 B( ?0 g- r
兄弟，你这铺的组织是不是有点过密啊，你想屋小了人肯定站不开走动不方便，就像你这种情况，这么密你让细胞往哪爬啊

wuhuaguo88l

由于组织块密度太大，培养基的粘度也会很高，不利于细胞的爬出和生长。我们实验也出现过，后来把密度降低，细胞就能爬出来了。

理一2010

1、组织块太多了，这个量我们差不多要三皿，2、首次贴壁培养的组织块不需要这么多培养基，10cm dish你试试7-8毫升，3、不需要加双抗大庆等，也不需要酒精洗，用PBS洗两边就可以，4、建议更换培养基

tingting2113

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4 |- V; a( g; a% N; c5 O8 f8 e: W9 C( F
1、运输过程应该没问题，以前我们直接放在无菌瓶子里，然后冰盒里拿回来，也可以的。8 Y) s/ o# ?: {- }8 }$ h6 T* k
2、洗的时候可以不用酒精，就剪成一段一段用含双抗的PBS洗就行，多洗几次。5 {0 _4 V* p& _0 B* M6 f- v
3、组织贴块，贴的太密了而且也不均匀啊，最好能让组织块单层分散开，我觉得你这一个皿的量都能铺三个了。以前我们用消化培养的方式，效果不错。5 ~7 G* K9 l" N% M# b
4、适当增加血清含量，15~20%