求助，原代分离羊膜上皮细胞不贴壁

听不到

回复 alicia_86 的帖子( p$ ]2 u( e' G) b1 T  U7 f' s
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胶原酶消化下来的不是大部分是间充质吗？培养基应该没什么问题，像EGF，血清这类必需的培养基里都含有了

alicia_86

我们用胶原酶消化的，个人也同意楼上说你培养基的问题。。

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回复 fancys1028 的帖子% l/ P* J7 `0 C( c+ {' p
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那你们消化步骤是如何呢？重复消化吗？我怕我消化时间太长

听不到

回复 qiaozhong.9876 的帖子
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( ~7 q# C8 ^; Z你这样不会消化时间太长了吗？我现在就是怀疑是消化时间太长导致细胞不贴壁的...而且初始你去血之后的羊膜是不是有点发白的那种很薄的膜？我怕消化10min后弃掉的消化液里有大量上皮细胞啊...我用的培养液是promo cell的一个培养基，基本不能有问题。血清是gibco的，也不能有问题

听不到

回复 一转身的距离 的帖子4 b" A9 `( r3 u& h: ~
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我试了0.05%的胰酶，与0.25%的胰酶操作步骤相同，但是都不贴壁

qiaozhong.9876

回复 听不到 的帖子3 s6 r5 l! `2 s, r: V
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我现在一直在做胎盘羊膜上皮细胞的分离与培养，我分离的细胞基本上很少有不贴壁的，我一般胰酶消化10分钟后去掉再加胰酶消化一个小时，没有重复消化，在消化半个小时后摇一摇继续消化，我觉得是你的培养基和因子的问题，不知道你用的是什么牌子的培养基和血清，血清最重要

fancys1028

胶原酶消化的话  得到的是间充质啊   做原代一般我们都用的是 含0.02%EDTA的0.05% 胰酶

yuanyecat

胰酶太厉害了，第一次可以用胰酶，但是第二次消化用不那么厉害的试一下，例如actutase。还有检查一下培养基是不是有问题

一转身的距离

个人觉得你的消化下手太重，0.25%的酶浓度太高了吧？另外消化时间太长对细胞的贴壁能力会有直接的影响。

听不到

而且我查到说胶原酶对上皮细胞的分离更好，但是我看大家做的好像都是胰酶消化时得到的羊膜间充质细胞比较少，加了胶原酶之后就会得到的羊膜间充质细胞比较多，难以得到比较纯的羊膜上皮细胞，所以想知道有人用胶原酶消化羊膜得羊膜上皮细胞的吗？