成脂诱导失败

yiwuya007

大家讨论一下，为什么成脂诱导总是细胞死亡呢?成骨诱导却非常成功。
+ y8 c& P+ y" L+ v% g+ p大鼠骨髓MSC，P2-3代，地塞米松，IBMX，吲哚美辛，胰岛素，DMEM-High glucose，
8 N3 v/ x' e: f# @& F9 o每种剂量就是按照文献和大家讨论的剂量，& w/ V- k) v( S) Z
第一次诱导都失败。第二次，诱导3天，普通培养基3天，轮流交替，还是细胞死亡。& Q' o5 E! v+ d
大家怎么诱导的？

加菲菲

我们都是直接买成品的试剂盒回来的，据师兄说，他尝试过自己配制诱导液，但效率不好，用成品的试剂盒就好了。另外，诱导过程中要控制好细胞密度，做好对照组，这样就可以知道是不是细胞的问题。

yiwuya007

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( b# V; p. g3 G& _2 i7 q, h8 F: E- x+ l6 p! \; \
对照长得很好
) J4 {5 a: _. f你们买的哪家的成品？

加菲菲

回复 yiwuya007 的帖子$ u0 z* L2 ?5 ?) w& a6 Z6 _! l

6 N+ W$ y- e! u* f一般赛业或GIBCO的都可以，GIBCO的比赛业贵，质量也好。

791849046

gibco  kit

weijunning

我们就是自己配制的培养基进行诱导的，成脂诱导实验非常成功哦；培养基你可尝试换成F12培养基，不要用高糖DMEM。

yiwuya007

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3 b% G+ M% n: z) f% T# O# L! Q. ~% V# N% [
能参考一下你们的诱导配方吗？
3 H7 K9 K8 m2 I5 o: A还有你说换成F12的培养基，是DMEM/F12还是就是F12培养基？

fisherwang

我们用的成脂诱导配方为：
( v/ {( [2 x& g" Q) h- N3 o' a地塞米松0.5 uM4 Y9 U! n6 V& O
IBMX  0.5Um6 ~$ P. w" [( J: Q7 o6 l# u
吲哚美辛 50 uM  x; I9 o. {. d5 ~6 H$ I
培养基用的是低糖DMEM。
* \8 \7 o/ d' M5 M, d1 c! M诱导21天

chichao0000

成脂诱导细胞初始密度一定要大,我一般是长满细胞后,换成成脂诱导培养基,诱导7天左右染色.