成脂诱导失败

yiwuya007

大家讨论一下，为什么成脂诱导总是细胞死亡呢?成骨诱导却非常成功。
0 ]2 C- |7 X) z大鼠骨髓MSC，P2-3代，地塞米松，IBMX，吲哚美辛，胰岛素，DMEM-High glucose，
' w3 e8 i7 _7 e) J3 u每种剂量就是按照文献和大家讨论的剂量，0 i' n6 Q/ p! I* c2 U/ C
第一次诱导都失败。第二次，诱导3天，普通培养基3天，轮流交替，还是细胞死亡。2 b* R6 B0 C# Z# q/ R$ }- {( V
大家怎么诱导的？

加菲菲

我们都是直接买成品的试剂盒回来的，据师兄说，他尝试过自己配制诱导液，但效率不好，用成品的试剂盒就好了。另外，诱导过程中要控制好细胞密度，做好对照组，这样就可以知道是不是细胞的问题。

yiwuya007

回复 加菲菲 的帖子
; i1 f2 D" D- {! w& k" e4 S( J! j# I9 x! n- X7 K: P
对照长得很好; T. I: l5 ]; N! x( ]
你们买的哪家的成品？

加菲菲

回复 yiwuya007 的帖子
9 b5 v( \. O, Y3 W7 D8 ^- Y9 b9 R8 \: e/ d; F' C9 Y
一般赛业或GIBCO的都可以，GIBCO的比赛业贵，质量也好。

791849046

gibco  kit

weijunning

我们就是自己配制的培养基进行诱导的，成脂诱导实验非常成功哦；培养基你可尝试换成F12培养基，不要用高糖DMEM。

yiwuya007

回复 weijunning 的帖子
4 ], R. {2 b4 {" E+ e2 i6 |1 G' U3 N9 k# S# ]; l3 P
能参考一下你们的诱导配方吗？! Z: ]* j- z$ S# w
还有你说换成F12的培养基，是DMEM/F12还是就是F12培养基？

fisherwang

我们用的成脂诱导配方为：( X0 ^6 o( H9 n7 [+ _- Q% x7 z7 Q. {
地塞米松0.5 uM
, b' V- b% N  o( V( B% g" i+ vIBMX  0.5Um
! p; `- ~, l! i4 R! c( P% D& N吲哚美辛 50 uM
2 l: `. N/ m& p  W培养基用的是低糖DMEM。
- X, B; D; q: {2 S& p诱导21天

chichao0000

成脂诱导细胞初始密度一定要大,我一般是长满细胞后,换成成脂诱导培养基,诱导7天左右染色.