成脂诱导失败

yiwuya007

大家讨论一下，为什么成脂诱导总是细胞死亡呢?成骨诱导却非常成功。
  k1 {4 U  q) ]  ^4 u" p  l大鼠骨髓MSC，P2-3代，地塞米松，IBMX，吲哚美辛，胰岛素，DMEM-High glucose，; N1 }, S  D2 q! J
每种剂量就是按照文献和大家讨论的剂量，! d/ i( ?8 B; m, O! ~( _$ \
第一次诱导都失败。第二次，诱导3天，普通培养基3天，轮流交替，还是细胞死亡。: L, o/ p" q) E# S2 D7 `
大家怎么诱导的？

加菲菲

我们都是直接买成品的试剂盒回来的，据师兄说，他尝试过自己配制诱导液，但效率不好，用成品的试剂盒就好了。另外，诱导过程中要控制好细胞密度，做好对照组，这样就可以知道是不是细胞的问题。

yiwuya007

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2 Y! p# u: j; }+ f; e. Z, _% ]2 C( O1 B1 h9 B
对照长得很好+ p8 }. F9 r2 y0 i$ e! E( T( W
你们买的哪家的成品？

加菲菲

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/ x- Y) E) S( n9 J7 J5 r' A/ f) a0 U) F$ [* Q5 I
一般赛业或GIBCO的都可以，GIBCO的比赛业贵，质量也好。

791849046

gibco  kit

weijunning

我们就是自己配制的培养基进行诱导的，成脂诱导实验非常成功哦；培养基你可尝试换成F12培养基，不要用高糖DMEM。

yiwuya007

回复 weijunning 的帖子& f$ @5 J1 z2 t* D6 W  C8 k* Y

/ s$ w" \7 O9 d) r- g  f8 Y+ Y能参考一下你们的诱导配方吗？8 ]+ h; J' j! h# T3 K4 I$ o
还有你说换成F12的培养基，是DMEM/F12还是就是F12培养基？

fisherwang

我们用的成脂诱导配方为：
" Y5 O  m- G6 K  M4 K2 D- Y地塞米松0.5 uM
9 i# j3 [& W9 g7 H' K: [! e. z( GIBMX  0.5Um
- n- P2 t; e8 m# Q吲哚美辛 50 uM
" w* I- |& g$ b+ }+ J' M培养基用的是低糖DMEM。
  P( M9 u: l9 S+ e: `, \0 y3 E1 x( e诱导21天

chichao0000

成脂诱导细胞初始密度一定要大,我一般是长满细胞后,换成成脂诱导培养基,诱导7天左右染色.