关于MEF饲养层的制作，自己的一些总结及疑问，请拍砖

ceshishua

feeder制作方案：! r# @- b6 ^) b: o" ~- L
1、铺板前丝素处理
0 f3 [; E0 B8 ?% s+ |9 i' _- N1.1：复苏----扩增----丝素处理----消化/计数----传代铺板----过夜，12h后使用' {/ E. N( z7 e8 ^+ t* S  ~" M
      优点： 此方案可保证了feeder的细胞密度，便于把控。7 q! d; T* r5 i& a1 @
      缺点： 但是由于复苏后扩增的MEF是过量的，且丝素处理后最多3-4天内使用，所以会造成MEFs的浪费。
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+ c  p9 J4 B% J8 Q  b& L1.2：复苏----扩增----丝素处理----消化/计数----冻存----复苏--（复苏多久后？）--使用. Z, m+ O- X" V+ h3 t
    优点：此方案在丝素处理后对多余的MEF进行了保存，减少了浪费。
2 i2 P4 w% Y9 m' `; G     缺点：但是复苏的inactivated MEFs存活率不宜控制，则造成feeder的细胞密度不易把控。
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; B3 H7 _6 v6 E  k6 p2、铺板后&使用前丝素处理
' r( k5 l- Z& u: l* V% k- W% ~2.1：复苏----扩增----消化/计数----传代铺板----丝素处理----过夜，12h后使用
* V% A8 N3 |: x3 d, f$ A2 ]0 e   
2 ?1 y" o$ h; d6 r- G1 _优点：无特别优势，只是将方案1.1中“丝素处理”一步移到铺板后进行。
  W) h; g2 c- j0 l3 ]' |3 T     缺点：1.1缺点+丝素清理的干净程度不如“铺板前丝素处理方案”
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" D9 A. L2 j! N. @8 Z6 }3 Y2 {
2.2：复苏----扩增----消化/计数----冻存----复苏--（复苏待细胞长至合适密度）--丝素处理----过夜，12h后使用
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优点：此方案在某些条件下弥补了1.2的缺点：只是在feeder细胞数不足的情况下还能等其长到合适密度再进行丝素处理。/ H! W1 n4 ]0 t$ t0 j
     缺点：丝素清理的干净程度不如“铺板前丝素处理方案”
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两个问题
7 s# _' Y& j1 Y关于明胶包被：我们用的塑料细胞培养皿，本身贴壁效果不错，感觉不用明胶效果无差别。请问明胶的使用是否必要？除了促进贴壁还有其他什么作用？) M4 w) p" F. k4 _# _% Z) h
关于MEF的培养基：丙酮酸钠必须吗？含不含HEPES是否有影响？血清有无特殊要求？Gibco的方案中建议使用ES Cell-Qualified FBS，看起来比其他的他们家的FBS品质级别高些，这应该是故弄玄虚吧，有无必要非得那么高级别？' |, Y7 g9 n: X$ ?( U$ a
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mecol

回复 ceshishua 的帖子
( g  f. Z3 p+ t* x0 }/ |  m
2 O) P4 X- U% n% F* U( j4 {建议明胶包被！因为你的feeder是要使用一段时间的，不是1-2天。经过有丝分裂抑制后，其会慢慢从板子上脱落的。" N; {, j5 b2 z' C' J
丙酮酸钠不一定需要。血清不必使用太好的，国产的足够，Gibco的有点大材小用。
/ L- d' U3 l; w5 c' f& a/ U楼主的冻存液是什么成份啊？

ppcl2

塑料细胞培养皿一定要用质量很好的，即使这样也要明胶包被！
# L" M* G$ g( O+ Q  Z- |5 C6 LMEF的培养基血清无特殊要求，一般FBS就可，但铺ES前要用少量ES培养基洗一次。9 `8 w. J  c! S; O) m0 Q

& K9 K$ _# a( M5 `. X) L, i3 G1、铺板前丝素处理feeder制作方案明显好于2、铺板后&使用前丝素处理！. P& A5 e1 y2 ]! {, B; u
铺板后&使用前丝素处理，不能完全去掉丝素残留，有可能对ES培养造成危害。