手采集外周血培养CIK疑问！！！

lyj-0017

想咨询关于手采外周血培养CIK细胞的几个问题：
: n6 h) ~/ B% ?9 C  A1、采集的外周血是先离心富集血细胞，再用生理盐水稀释后加入淋巴细胞分离液进行分离，还是先把外周血进行稀释再加入淋巴细胞分离液进行分离？这两种方式哪种方式更好一些？
& g9 l7 c* E1 U& F4 v; \2、如果采用经典的培养方式，D0 加IFN-r，D1加anti-CD3和IL-2，D0时往培养瓶中加入PBMC后必须经过2小时或者过夜贴壁，然后把悬浮细胞吸出来之后再加anti-CD3和IL-2吗？, g+ t$ x* R' x) m. Q/ b
3、如果贴壁后剩下的细胞用来诱导DC，第7天进行DC与CIK混合培养的话，是将所有的DC全部与CIK进行混合培养，还是将DC按一定的比例与CIK进行混合？
. Z/ M! R/ t' i7 b3 e, }8 E- h+ J4 B7 e
$ i% H5 O7 A) f( }请大家不吝赐教，谢谢哈~

lyj-0017

回复 nkcell 的帖子
% Q' a- z: Q0 d) \1 a( M# X* E: @
请问按照什么比例混合比较合适？

lyj-0017

回复 a276038921 的帖子; z8 ^5 I, W5 u- ?3 z) K

2 F% H% g' a" j0 ~, Q. c6 L恩，感谢，其余两个问题呢？

lyj-0017

回复 levell 的帖子6 b: k, {- r/ q+ z$ j, K

8 W( o- o) J+ S) [采集的外周血离心后，分离出血浆，剩下的不就只有细胞团了吗？再怎么按照1:1加PBS稀释？

lyj-0017

回复 a276038921 的帖子1 Q! C2 m+ n; C9 V' z( F) g
. d( u, z, ]' a6 W* S. L, ]0 h
混合的时候，有没有可能加入的DC细胞太多，部分DC细胞因接收不到生长信号而凋亡？

lyj-0017

回复 levell 的帖子" i3 J6 G" z$ J1 A: G2 \6 ^
" j# ~9 `+ J6 ]! O- ^
首次铺瓶贴壁时，加入培养瓶中PBMC的密度一般控制在什么范围之内？分离出来的悬浮细胞再次装瓶的密度范围是多少？

lyj-0017

回复 aochongyu 的帖子
4 s9 G5 t! u1 j9 @# c6 g
: @$ u6 ?8 ?6 F5 r0 q我个人也感觉先离心外周血再加盐水稀释会更好一些，无奈领导执意认为后者好~

lyj-0017

回复 levell 的帖子* f& ^8 Z9 f' E( ?

% [7 X! s; j, O$ cOK，非常感谢！

lyj-0017

回复 xyz2120091064 的帖子3 w3 [% a4 x- N
. a" M: D+ o! ]
自体血浆不是已经离心去除掉了吗？

lyj-0017

回复 Ivan0108 的帖子
' D6 t% b4 u, q/ s( g  v
6 J- b; A5 s. B1 i* w1 E( O7 x! m; X3 y自体外周血离心的转速有什么要求？会不会有的患者外周血细胞不能完全离下来呢？再一个，抗凝剂过多会不会影响血细胞富集？