手采集外周血培养CIK疑问！！！

lyj-0017

想咨询关于手采外周血培养CIK细胞的几个问题：
- P. M. c! A0 v+ r8 W$ ]6 ]2 D& y3 L1、采集的外周血是先离心富集血细胞，再用生理盐水稀释后加入淋巴细胞分离液进行分离，还是先把外周血进行稀释再加入淋巴细胞分离液进行分离？这两种方式哪种方式更好一些？* f- U7 p! n- O6 b. H
2、如果采用经典的培养方式，D0 加IFN-r，D1加anti-CD3和IL-2，D0时往培养瓶中加入PBMC后必须经过2小时或者过夜贴壁，然后把悬浮细胞吸出来之后再加anti-CD3和IL-2吗？( Q2 Q- G) r1 d. H  G
3、如果贴壁后剩下的细胞用来诱导DC，第7天进行DC与CIK混合培养的话，是将所有的DC全部与CIK进行混合培养，还是将DC按一定的比例与CIK进行混合？
1 |' T4 l  _) A
5 x. `5 y* g/ I& j请大家不吝赐教，谢谢哈~

nkcell

这需要看用的是什么牌子的淋巴分离液，还有离心力的大小，前面的方法时间长，对细胞有损伤，后面的对分离液和转数有要求

nkcell

2.是正确的
* ^. {1 U1 U" t( W5 a) ^; ?) J  `

nkcell

3.是按比例混合的

lyj-0017

回复 nkcell 的帖子
. a5 ~3 n; p3 F& B5 d
  p0 h/ \2 u4 L6 J请问按照什么比例混合比较合适？

a276038921

个人感觉 先分离富集血细胞比较好 收集细胞量比第二种多

lyj-0017

回复 a276038921 的帖子! p0 o6 V7 a4 L/ }* |
/ H# h8 Y6 B/ W) m7 P2 D' p. x
恩，感谢，其余两个问题呢？

levell

1、 先离心，分离出自体血清用于之后的细胞培养，然后血细胞至少1:1加入PBS（生理盐水中细胞状态并不好）稀释，再用淋巴细胞分离液分离单核细胞。3 V3 p! r' l7 X5 d# Q# u
2、2小时贴壁移出悬浮细胞培养，因子添加就按你说的
$ M9 |$ y% ~9 U% g% D5 d3、将DC按一定的比例与CIK进行混合，一般1:10吧

a276038921

同意楼上的说法

a276038921

回复 lyj-0017 的帖子3 i# V' L7 e) K- u/ D1 k- v& |
, O# B: G1 X2 j& e6 C$ \0 _
但是DC和CIK混合的时候我是 全部混合在一起培养 这样比较省事个人感觉 主要还是要看你要干什么用了
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