MSC的PCR测定方法

风自在流年

请教一下大家，最近我想做脐带间充质干细胞在动物体内的存在情况，想用PCR的方法进行检测，请问可以通过测定CD73、CD90、CD105的表达情况来指导MSC在各脏器的存在情况吗，如果不行一般测定人源干细胞是用的什么marker呢，谢谢。

yaoguanping

CD45、Cart-1基因检测、Sry基因等都可以啊！

风自在流年

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谢谢，不过CD45是MSC不表达，我是想检测MSC在各脏器的表达情况，主要是想知道HuMSC里面区别于小鼠的特定基因，谢谢

yuanyecat

3 D# w4 S' ~+ A8 t+ {# c1 `* g( _* |$ @0 P
间充质干细胞一般表达 cd29，cd44，cd73，cd90、cd105； cd14，cd34（骨髓间充质，造血干细胞抗原），cd45（骨髓间充质，白细胞共同抗原）、cd106、cd133和hla-dr（mhc-ii）% x0 n- Z) m- Z% p9 i8 d
如果你想检查检查间充质干细胞在动物体内的存在情况，我推荐pkh26试剂盒（sigma）（089k0781）荧光显微镜下可见pkh26标记后呈红色荧光的干细胞。
0 N6 X4 H1 c, w0 U1 ^间充质干细胞理论上会分布在肺脏、肝脏及肾脏皮质。  f$ b7 Y- n$ ]" @8 p& K0 _
或者你可以用核酸探针。' |4 v7 e' d1 U, @: |$ ~

风自在流年

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9 i7 A3 Z/ f# Z, [3 y0 u9 m谢谢你的回复，我目前想的是利用MSC来源于人，依据人源线粒体DNA的序列去做PCR，不知你觉得这样可行吗，谢谢了

yuanyecat

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, G. B* [1 n. ^  {) g* f* `. s$ M3 A
你要不要求干细胞在脏器的确切位置，因为间充质干细胞在同一器官的不同组织分布是不同的。比如，在肾脏中主要分布在肾脏皮质，不是在肾小体。而肝脏就是全器官分布了。1 Q8 |$ _; [# L& g
另外，你一定要做阴性和阳性对照，你的PCR引物确定不会再动物组织p出阳性条带。这样你会得到假阳性结果，但是如果你是要发高水平的paper，我推荐你用荧光探针，可以得到干细胞全器官具体分布。
. U& F. m6 `% {2 t! V; c最后，你必须要把动物的血放非常干净，因为间充质干细胞会随血液流动，如果你不把血放彻底干净的话。你会在每一个带血的脏器得到阳性结果，这是血液中含有干细胞的结果。那样就是假阳性结果了。我推荐你用心房推注生理盐水，应该可以把血弄干净

风自在流年

回复 yuanyecat 的帖子6 k  L% `2 i6 Y) l4 s6 e

& F1 o! w5 P) ]$ ]太谢谢你了，我之前我有用近红外的荧光染料标记，但是只能做1个星期就无法检测了，不能覆盖细胞在体内分布代谢的全过程，所以考虑用PCR，那请问您所说的荧光探针法具体指的是，谢谢。

yuanyecat

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你把相关器官组织切片，然后做荧光杂交。用抗体，DNA探针，RNA探针都可以，比PCR好。我推荐你用FISH，荧光原位杂交，可以清晰干细胞看到具体位置分布。你切片制作技术好不好，如果不好，我推荐你找个技术熟练的人教教你

风自在流年

回复 yuanyecat 的帖子' W& I$ X6 l* T% h, ~  `
$ j( z& X; L" Q" i& g
好的，谢谢你了，之前考虑PCR灵敏度较高但是实际操作似乎存在问题，万分感谢。还想请教一下，如果我的细胞之前就标记了GFP，是不是也可以免疫荧光的方法。

yuanyecat

那我推荐你用活体荧光显微镜。GFP切片处理以后就看不到光了，蛋白变性了。