请教各位老师有关流式检测CIK细胞成熟程度

baby00000003

CIK培养第六天，按照常规方法，2.5小时分离，加IFN-gamma，大约26小时加anti-CD3、IL-2、IL-1a，最长3天换液1/2，培养基变色立即换液，保持细胞密度不超过2*10^6/ml* W' A. ?$ d1 _$ Q$ V2 ~4 R" x. [4 q
7 O) f6 g$ x- I* Z) E: y8 c5 [  i: a! @
今天取细胞样本跑了个流式，但是CD3，CD56阳性率很低的说* K. l+ ?1 |% |4 ?( k* p
下面是这次跑流式的图，
0 A8 Y4 X3 s4 l! v: B, I因为前辈遗留了一部分抗体，都是PE的，没法做双标，不过第一次实验，当作是趟地雷省着凑合用了
; K; V% U3 _! L  E6 f2 M8 d
5 v4 B0 f" e! p想请教各位老师，; B# f. I  D6 U; B
有可能导致CD3、CD56阳性率低的原因？- g! `& ^' ]8 W2 A6 f
有关FSC和SSC画门，像图上这样画是正确的画法么？# X$ @( W& U! n8 f0 `: g
我觉得如果靠诱导单核细胞成熟而生成CD8，是不是应该像这样把单核和淋巴都画进去呢？: C' D$ u4 W/ y1 {" k' P0 x* `

dollar007

1确定下你的试剂有否过期；
3 z9 G* ^* R5 ?. e1 ^9 q5 I2对照FS/SS分析图中，碎片和死细胞过多，设的门框了部分碎片和死细胞；可以通过调高FS域值屏蔽掉部分无关数据信号；
% H( h3 }+ _8 T3对照直方图中，单线门设的过右，就把它设定在右边锋和X轴交叉的地方，拖尾的部分可以容忍，一般对照不会出现，细胞养不好，制样差就易出现；
$ S2 k+ l5 f  h* i% D( x4然后再看看你的样本数据分析，是否双阳提拔起来了？

baby00000003

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5 U) ^' F9 i% |2 d5 ?: s
- g% C+ b  S, b' {: A' v% M5 i您说的门框内的死细胞和碎片指的是哪一部分呢？4 u2 q; n- |% Z0 c
是说70/70范围之内的都算么？& t# D- j, \" [+ z4 j
我还以为最角落里的是碎片，临近角落的那一群是淋巴细胞......

dollar007

左下方的是碎片；目标细胞在你的图中靠下方一点；左边的是死细胞。

dollar007

你培养过程中，要更换培养瓶，这样贴壁细胞就去除了；分离后红细胞残留不多，在培养中不增殖，很快就会成为劣势群，比例不高。

lyj-0017

回复 baby00000003 的帖子4 P* j9 ~3 p% x1 w5 T( x8 ]( ]7 I! b, _
9 w* X1 d  [5 x  E# y) \
从你的同型对照来看，阈值可以设的再大点，去除更多无关信号，圈门没啥问题，CD3单阳结果还凑合，CD56单阳的结果我认为可能与你培养没多大关系，估计跟你的抗体有关。你用的CD56-PE是哪个公司的，克隆号是多少？是抗人CD56抗体吗？

baby00000003

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) O/ h& W9 S4 M' {. Q0 x, t/ T! v- a& G( p2 k  Z5 {7 y# H  T
是BD的....555516,包装上说2016年才过期.......

lyj-0017

回复 baby00000003 的帖子0 G; V% `" E  N) n0 N9 d* b8 o
% V" |% \3 Q* Z8 V
一般常用于检测人CD56的克隆号为NCAM16.2

hyg5481655

回复 dollar007 的帖子# s# D) H% i/ m0 I* S

( w% i1 k) m. {3 V) n请教，调高FSC阈值，比如到50，000左右，除去部分碎片和死细胞，圈中的CIK那一群细胞的比例大概有多少？

细胞海洋

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1 d1 G" U7 b: E6 |! t
$ l+ k2 x. I" F, ^# T: e' G- j, r建议你发新帖提问