继续请教有关DC的培养问题

baby00000003

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: t5 s! P5 h$ @; r. V* D& ^先上图- A# M2 q$ W% f, h, a2 |2 \. Z- @

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首先想请教各位老师，DC漂浮以后有成团的现象，如图中的箭头A，有没有必要特别每天把它吹散呢？
. q' p+ G! C  I; j3 Y& b& Y这个是小团，也有比较大的细胞团，几十个细胞聚集成的.....# h: Y) N$ m# P  H; Q$ N4 V* H
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第二是好奇，从形态上来说什么样的DC算是完全成熟呢？
+ R3 U' [5 G% o- C1 b比如从树突的明显程度来看，有的很明显，有的几乎看不到，如图中的箭头B1/B2% b: d  D* ~5 _& H3 s" o" c
这2个是很明显的对比，还有大部分的细胞处于2者之间
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然后，有些细胞形态不是球形而是途中箭头C所指的不规则形状，这个是不是正常现象呢？
- R2 L" P! w7 H7 p$ ]如果是异常，想请教有经验的老师们可能的原因？& K3 `4 t8 I* a" y
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最后，DC培养瓶里偶尔能见到如最后一张图的那个东西，想请教，这么大的尺度可能是什么？细胞？) `/ l" x* l2 t+ H' k5 `
这个东西贴壁很牢固，用酶无法消化

暖羊羊

非常同意楼上（yaolinzhang）的观点，DC培养过程中基本经历三个阶段，即：单核细胞、未成熟DC、成熟DC。单核细胞是完全贴壁的，后期诱导后就会慢慢有悬浮细胞产生，从显微镜下观察形态差别不大，都是圆形周围有细微绒毛出现，所以单从形态观察看不出成熟还是未成熟，我们的判断标准也是流式检测：CD83（成熟标志）、CD80/CD86（粘附及共刺激因子）、HLA-DR（抗原提呈分子）、CD11c（迁移受体）。通常在加完促成熟因子24-48h成熟度（CD83）大大提升，一般能达到60-70%左右。( G+ z0 L2 S1 I5 l; ^+ v9 E& p
前面有同仁提到成熟后贴壁细胞不建议收集，怀疑是杂细胞，这跟培养使使用的培养基也有关系。比如我们近期用的xVIVO培养基，测流式的时候分别检测了悬浮部分和贴壁部分（细胞刮刀收集），贴壁部分也大部分是DC细胞跟悬浮细胞表型差异不大，所以最后我们收集细胞的时候  都会把悬浮细胞和贴壁细胞一起收集。9 B$ ]6 a9 p7 c3 ~7 F4 z0 \; v/ \8 U
另外，关于是否吹打，我们平时培养的时候不吹打，细胞抱团生长是正常现象，只要不是过于密集不用采取任何外力来分开。

baby00000003

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- Y/ n! e! Y) a0 w7 H7 y* G- L' ]- b- O1 g, J2 H6 N, z8 Z
这是我第一次做...就常识来说，判断不出那个是啥....  a! C1 s% k# l3 k- L
有没可能是很多某种贴壁细胞形成的“贴壁细胞团”呢？
1 l, C1 G' `( C. p那个大家伙中间浅色的一圈是很多细胞核？

cloudycity

都飘起来了，就成熟了吧，要严格还是得做流式···好像以前试过用4度预冷的pbs轻吹来收集···最后那个大家伙，你每次养都会出现吗？以前养的也有贴壁的消化不下来的巨噬细胞，你这个也太大了···

baby00000003

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4 V4 c" A  T2 t  q$ D. ?' `4 V; }$ K9 R
多谢前辈指教。
0 @/ j$ v# H7 F# P因为DC比较金贵，不想浪费太多在流式上，想通过外观判断大约什么时候可以做流式看看....

张钰0206

有一些DC细胞的显微结构还带有小尾巴。贴壁的细胞如果最后不能自己飘起或者不能用移液枪吹起的话，有可能是杂细胞。成熟的DC应该是飘起的，如果不自己飘起，不建议用枪吹打哦。细胞成团属于正常现象，如果细胞团块比较疏松则每天吹打没有必要，而且吹打会使细胞受伤。如果细胞团块过于密集，则建议吹打。

奇幻雪蓝

支持楼上的解释，特别是第二条。对于我们搞研究的来说，肉眼的观察只能作为参考，测试所得数据更具有说服力，也就是更有参考价值！

yaolinzhang

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3 [" D' z, B$ L' E
: ]9 t5 z! r7 O# a" o1.成团的细胞在培养过程中没必要吹散；7 ~0 s9 X* [$ d/ M( s4 f( Y$ D
2.DC成熟与否很难从形态上判定，需要结合MHC2和CD80、CD86、CD83的表达及细胞因子的分泌综合来判断；( N+ O( y' P2 K$ n( V
3.出现形态异常的细胞，属于正常现象，可能是细胞聚集，或其他细胞吧（...）;
. j: u! H9 C6 h& W! R4.DC也有亚群细胞；& b8 J; ?8 Z: T
5.最后一张所示应该不是细胞