继续请教有关DC的培养问题

baby00000003

3 q7 ^5 V+ k2 f0 C* Z8 b3 \

% n6 q5 Y) J  g6 [$ J9 b先上图+ h# ?% g6 u* i6 z5 ^$ z) Z9 W
! p+ Q- Y( n" I# u: w, K) r

- x4 ]( R& }3 }+ J
4 I" p# S, ~( U* m' G, a9 \2 C  i9 n7 h
首先想请教各位老师，DC漂浮以后有成团的现象，如图中的箭头A，有没有必要特别每天把它吹散呢？: }' [. G6 U& b: b; U# r
这个是小团，也有比较大的细胞团，几十个细胞聚集成的.....- h5 U- z$ O  y' z" r

, r& \  _# w) Z2 h& j7 u第二是好奇，从形态上来说什么样的DC算是完全成熟呢？
; n+ M) V$ {( h; ]8 U  L6 e# [比如从树突的明显程度来看，有的很明显，有的几乎看不到，如图中的箭头B1/B2- @2 U2 ^* q3 G7 I" ?2 F! O* J
这2个是很明显的对比，还有大部分的细胞处于2者之间
4 U) f/ H! h9 M; X" {- R' E1 D. G8 K
9 [! s2 ]/ v& f, ^+ _然后，有些细胞形态不是球形而是途中箭头C所指的不规则形状，这个是不是正常现象呢？$ g' J% o. V* {
如果是异常，想请教有经验的老师们可能的原因？
2 V0 k; ]6 R/ o5 H0 E6 A/ j9 ]( M* z% Z: I$ }5 z5 R; V
最后，DC培养瓶里偶尔能见到如最后一张图的那个东西，想请教，这么大的尺度可能是什么？细胞？, R1 p; S6 w% W) K. Z
这个东西贴壁很牢固，用酶无法消化

yaolinzhang

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) O1 c8 p4 W* ^; `; v. v
" g; z. `/ ~0 ^% C1.成团的细胞在培养过程中没必要吹散；
* y% `$ I+ c7 Y5 P7 M2.DC成熟与否很难从形态上判定，需要结合MHC2和CD80、CD86、CD83的表达及细胞因子的分泌综合来判断；' V" b  t8 {; Y8 j1 t
3.出现形态异常的细胞，属于正常现象，可能是细胞聚集，或其他细胞吧（...）;
' b' G( \& }  n, ]4.DC也有亚群细胞；
) B2 Z, G5 M/ S; R. |0 R7 {5.最后一张所示应该不是细胞

奇幻雪蓝

支持楼上的解释，特别是第二条。对于我们搞研究的来说，肉眼的观察只能作为参考，测试所得数据更具有说服力，也就是更有参考价值！

张钰0206

有一些DC细胞的显微结构还带有小尾巴。贴壁的细胞如果最后不能自己飘起或者不能用移液枪吹起的话，有可能是杂细胞。成熟的DC应该是飘起的，如果不自己飘起，不建议用枪吹打哦。细胞成团属于正常现象，如果细胞团块比较疏松则每天吹打没有必要，而且吹打会使细胞受伤。如果细胞团块过于密集，则建议吹打。

baby00000003

回复 yaolinzhang 的帖子' ~- ^- N0 y) o8 }5 p$ \

6 E8 v, q! ^0 C, H+ E8 G; j  l多谢前辈指教。
1 ^0 P) S0 S1 y& R4 e因为DC比较金贵，不想浪费太多在流式上，想通过外观判断大约什么时候可以做流式看看....

cloudycity

都飘起来了，就成熟了吧，要严格还是得做流式···好像以前试过用4度预冷的pbs轻吹来收集···最后那个大家伙，你每次养都会出现吗？以前养的也有贴壁的消化不下来的巨噬细胞，你这个也太大了···

baby00000003

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, M% ^" l9 C0 G' w# f" C- c
* l, y# v8 I) H& ?% Q* X这是我第一次做...就常识来说，判断不出那个是啥....; T6 J' E+ ]5 L  j; Y" d3 S
有没可能是很多某种贴壁细胞形成的“贴壁细胞团”呢？
5 r3 D3 A  H# ]3 k那个大家伙中间浅色的一圈是很多细胞核？

暖羊羊

非常同意楼上（yaolinzhang）的观点，DC培养过程中基本经历三个阶段，即：单核细胞、未成熟DC、成熟DC。单核细胞是完全贴壁的，后期诱导后就会慢慢有悬浮细胞产生，从显微镜下观察形态差别不大，都是圆形周围有细微绒毛出现，所以单从形态观察看不出成熟还是未成熟，我们的判断标准也是流式检测：CD83（成熟标志）、CD80/CD86（粘附及共刺激因子）、HLA-DR（抗原提呈分子）、CD11c（迁移受体）。通常在加完促成熟因子24-48h成熟度（CD83）大大提升，一般能达到60-70%左右。( y* I0 m' }+ K& ]; a) w
前面有同仁提到成熟后贴壁细胞不建议收集，怀疑是杂细胞，这跟培养使使用的培养基也有关系。比如我们近期用的xVIVO培养基，测流式的时候分别检测了悬浮部分和贴壁部分（细胞刮刀收集），贴壁部分也大部分是DC细胞跟悬浮细胞表型差异不大，所以最后我们收集细胞的时候  都会把悬浮细胞和贴壁细胞一起收集。8 ^9 `! a" r$ M8 l7 N, V
另外，关于是否吹打，我们平时培养的时候不吹打，细胞抱团生长是正常现象，只要不是过于密集不用采取任何外力来分开。