胎牛血清培养转无血清培养间充质干细胞

莫邪小仙

最近做有血清转无血清培养，细胞总是死掉。大家帮忙分析一下，具体操作如下：1.复苏之前冻存的有血清培养的细胞，传代培养。2.待细胞状态较好时收集细胞，用无血清培养基洗两次，再重悬接入新瓶，加入无血清培养基培养。3.但是第2天细胞就死光光了。。。( [* N! h  t! Q0 B& m+ k
加大接种密度也不行，另外好多人都说要进行无血清梯度培养，但是那样要经过好几次传代，能有什么办法直接从有血清培养直接转到无血清培养，并且细胞不全部死完的？

791849046

1. 培养瓶的问题；% u. h! x6 ?& C0 W
2.培养基的问题，你是自配的还是购买的成品的，细胞放在盐水中12个小时，细胞活率都在70%以上，

791849046

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你真逗

xiongwangyj

我的意思是慢慢降低浓度到后面是不是就可以不加了呢？那就是真正无血清了吗？

维维睡啦

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有可能你一直用血清培养，造成细胞已适应有血清的培养环境，在不添加血清后细胞已不能生长了。这样的话你可能要一直使用血清替代品了。要不你就还是降低浓度试试~

xiongwangyj

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难道最后可以不要血清替代物了？不行吧！9 C3 V6 m# Z3 q# F. y  n0 a8 d' E6 T; H

维维睡啦

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那你还是想无血清培养的，就继续使用血清替代品培养吧，我就用的这个，生物活性高。

莫邪小仙

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$ c8 B- D. @$ ^9 h9 J是逐步减少血清量的，细胞还是耐受不住又都死了，有什么好的办法没

莫邪小仙

回复 王张凡 的帖子) x* z3 f4 E, ?/ |8 w/ s% I% p5 u
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从10%转到5%又转到1%，细胞还是死了。。怎么办

维维睡啦

刚开始转化为无血清培养，加适量的血清替代品就可以，不过血清替代品较贵，生物活性是血清的5倍，这样在复苏培养就可以无血清培养了。如果考虑成本，可以在以后培养中逐代减少添加量就可以了。