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细胞消化和冻存   [复制链接]

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楼主
发表于 2015-3-30 17:46 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
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大家消化细胞后都会离心重悬吗?有时偷懒直接把胰酶吸走就加完全培养基重悬分装了,所以EDTA对细胞的伤害还是会大于离心吗?7 U0 i+ ]0 d8 J6 ?3 x
刚开始做不久,还没有冻存经验,有前辈用赛业的冻存液吗?效果如何?
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沙发
发表于 2015-3-30 19:48 |只看该作者
我在美国的时候养HEK cells的时候可以不用离心,细胞长的Okay!但根据我的经验,养原代细胞或者Stem cells, 因为细胞很娇气,最好重悬后离心,去掉上清中的EDTA。
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藤椅
发表于 2015-3-31 10:21 |只看该作者
一般都是加等量或大于胰酶的培养基重悬细胞,有时会洗两次后再冻存
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发表于 2015-3-31 10:49 |只看该作者
直接吸走胰酶也会带走一些细胞吧,使用这种直接加培养基方法主要还是看细胞生长状态吧,要是前几代这样做感觉对传代有一定影响;冻存液根据细胞种类我们一般是自己配,做预实验,没用过这个牌子。
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发表于 2015-3-31 14:16 |只看该作者
胰酶消化后直接加入培养基终止是可以的,我们有时传代时就是直接用培养基终止消化然后传代继续培养、、、、
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地板
发表于 2015-3-31 15:27 |只看该作者
传代时,离心后没有重悬过,没有影响;冻存也是这样的,感觉没有影响。
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发表于 2015-4-1 09:46 |只看该作者
回复 rosexinqin 的帖子9 ?$ d1 ]: g  o/ Z+ L0 b+ Z$ K2 T' X% S! ^
3 e; Y) m, v2 C& R! Q9 p
多谢前辈!

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发表于 2015-4-1 09:46 |只看该作者
回复 aochongyu 的帖子
* @- y' \' {8 |+ w2 F9 \  D$ D5 `: E1 z% M* @' \! v
有道理

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发表于 2015-4-1 09:47 |只看该作者
回复 月_幻影 的帖子
6 l- U8 e9 p! j( v2 O9 ?2 F! r" `: g; a, n
那以后原代就不偷懒了 传代想偷懒还得看细胞状态

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发表于 2015-4-1 09:50 |只看该作者
回复 aochongyu 的帖子
' p( y5 a- A( r" |- K/ i: |% y
, G+ F1 c- {# a* H这个牌子的推广说的是比程序冻存盒还方便高效(不会涉及到异丙醇) 只要细胞状态OK  复苏率可达90%以上
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