这次的CIK表型有点离谱，求大神解惑

baby00000003

先上图，
6 N/ D5 I# N9 q2 e& n+ t5 E  J
& K$ ~$ @3 R( N7 X9 u  Y# J
8 H. U' ~; Y! [# W这是培养至D4的外周血CIK
  k8 Q, v8 F1 P: v3 T9 ?) t' R不同以往的是CD3阳性率很低（图中的FITC）但是CD56阳性率相对较高（图中的PE）
" X* I: J! I& z2 T' ^9 e
9 f8 P: ]9 S4 mD0刚刚分离PBMC时的表型检测，CD3阳性率已经是50%左右，也就是说随着培养CD3的阳性率反而降低了# }4 }- N7 i9 d
9 E5 I& L1 r, ]' K1 v
CD56单阳性的会是什么细胞呢？
, y, P- |, i: A1 C6 R  f- \NK？: e# z0 N8 j7 m0 s4 f. h/ N; L
但是培养体系中没有加入IL-15不会有什么让NK增殖的东西吧？
* c; w* y  B/ M" `4 f7 G# @. x; M; b- n3 V7 d) L0 W& L! z
画门时隐约可以画出2个门，其中细胞数较少的P2倒是CD3阳性率靠谱，P1中猜测含有2种细胞，一种是CD3+/CD56-，另一种CD3-/CD56+，也像是不成熟的CIK和NK......
  ~. N9 E* g% K: b4 @
9 v0 g* R; ^7 |2 k求大神们解惑，感激不尽~

nailute1985

我估计啊，NK细胞吧……因为NK细胞扩增的话其实不是一定依赖于IL-15的，单纯的IL-2就可以的~

FreeCell

回复 baby00000003 的帖子+ R2 S) s5 e, L( `, |1 b* p1 H) f
. `6 W- m" `/ W: Q: l
嘻嘻，做个同型对照再读结果

cjsbaicai

第四天时间太短，多培养几天看下。另外，CD56一个指标说明不了什么，判定NK细胞的标准时CD3-CD56+，这个你可以把横纵坐标修改下看看。此外你这分离培养的细胞云图太散，而且还分为两群，可以从源头找找原因看

baby00000003

回复 cjsbaicai 的帖子5 j$ ]7 u/ i' |/ Q' {( d

9 \6 Q) m1 h, a# U/ Z那个图就是说有一群为数不少的CD3-/CD56+呢......( z- Q+ ?3 O6 O+ K0 ^; d
当然至今我也只做过5个样本，这种情况还是第一次......3 W' ^1 G6 I) X8 _. C
如前辈所说，且养着它看吧~

孙帅帅

D4 CIK细胞还不成熟~   等几天再做吧！

暖羊羊

楼主，我想问你培养CIK的时候加CD3单抗了吗？我们前期做过几次实验，以没有加CD3单抗为对照组的，分别在6d、14d进行流式检测，发现对照组CD3-CD56+细胞比较高，CD3+CD8+、CD3+CD4+比率都很低（应该大部分是NK细胞），扩增倍数也很低；实验组加入CD3单抗，CD3+一直处于95%以上，CD3+CD8+也明显升高。
1 |; [* V: L/ x$ \6 M/ zCIK是一群异质细胞，包括CTL（CD3+CD8+）、NK（CD3-CD56+）和Th1（CD3+CD4+），杀伤活性也是这几类细胞共同作用的结果。  N  x' z- t8 s: [
另外，左边那个图是第0天的吗？我从流式图上没看出来刚分离的PBMC的CD3+表达率达到50%以上呀？

张钰0206

细胞的存活率测了吗？NK细胞还需要测一个CD19才能确认吧。流式最先开始电压调了吗？还要做一个阴性对照，结果才可靠。

baby00000003

回复 暖羊羊 的帖子; p. l1 u& e* G" W7 Q
' V: L" T0 b+ n5 h  o. }4 X4 C
左边那个图是isotype，( I6 \6 b; ^! z5 u
当然加过OKT3，不然CIK长的少嘛~今天是D7，CD3+已经上来了，姑且猜测是个体差异吧,或者是实验时加错抗体了-_-......6 |/ u1 l; f1 u. f, o: m8 H
D0的图没有贴上来....

hsu86

建议到13天是时候再测流式，第四天细胞还没刺激起来，时间太早了
7 X" \, q  H% t0 E' ?9 l我也有过把CIK细胞养成NK的情况，有次做完流式一看80%CD16CD56，不相信又去了一次样，还是一样的结果，太神奇了，具体原因也不清楚