这次的CIK表型有点离谱，求大神解惑

baby00000003

先上图，! I; ^7 {! o1 H; K0 U! Y

9 }+ @  n# @/ t* ~7 [3 {9 L3 p0 o5 ^3 ^0 V, \* e6 m7 C. a2 {
这是培养至D4的外周血CIK% P4 F8 W1 g( ]* T( Y, j
不同以往的是CD3阳性率很低（图中的FITC）但是CD56阳性率相对较高（图中的PE）3 p0 E2 ^8 ^9 w. e7 p& b8 m$ r

0 l/ q! O, H6 |/ @5 ?$ O" ^# yD0刚刚分离PBMC时的表型检测，CD3阳性率已经是50%左右，也就是说随着培养CD3的阳性率反而降低了
  s2 A( ?+ c& M2 A- L5 o9 n: t" _- ^3 z2 \/ n
CD56单阳性的会是什么细胞呢？  Q2 _  W2 `5 M7 Z
NK？4 i) K1 _1 O7 X
但是培养体系中没有加入IL-15不会有什么让NK增殖的东西吧？: ?& T' l1 _& {' O# M, G* ?
; y3 a9 u$ \) X# s5 N
画门时隐约可以画出2个门，其中细胞数较少的P2倒是CD3阳性率靠谱，P1中猜测含有2种细胞，一种是CD3+/CD56-，另一种CD3-/CD56+，也像是不成熟的CIK和NK......+ c, S- K* o" a0 d& k5 \

7 U, ]8 e8 |, N- `' H& `' e0 L' X求大神们解惑，感激不尽~

nailute1985

我估计啊，NK细胞吧……因为NK细胞扩增的话其实不是一定依赖于IL-15的，单纯的IL-2就可以的~

FreeCell

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; `) b& H" l- ~* D0 y0 x' f7 O" F. w9 k' x/ x  L
嘻嘻，做个同型对照再读结果

cjsbaicai

第四天时间太短，多培养几天看下。另外，CD56一个指标说明不了什么，判定NK细胞的标准时CD3-CD56+，这个你可以把横纵坐标修改下看看。此外你这分离培养的细胞云图太散，而且还分为两群，可以从源头找找原因看

baby00000003

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' B. S' O0 q& p# f& N( f: N8 s
2 T" I4 v+ J5 t0 j$ \! G- L那个图就是说有一群为数不少的CD3-/CD56+呢......& {) ]0 [5 e2 L& P! m7 L- I! |5 R& `
当然至今我也只做过5个样本，这种情况还是第一次......
" R/ h  J+ l% p. x: |! S9 R( C如前辈所说，且养着它看吧~

孙帅帅

D4 CIK细胞还不成熟~   等几天再做吧！

暖羊羊

楼主，我想问你培养CIK的时候加CD3单抗了吗？我们前期做过几次实验，以没有加CD3单抗为对照组的，分别在6d、14d进行流式检测，发现对照组CD3-CD56+细胞比较高，CD3+CD8+、CD3+CD4+比率都很低（应该大部分是NK细胞），扩增倍数也很低；实验组加入CD3单抗，CD3+一直处于95%以上，CD3+CD8+也明显升高。
6 {9 W: d- S+ rCIK是一群异质细胞，包括CTL（CD3+CD8+）、NK（CD3-CD56+）和Th1（CD3+CD4+），杀伤活性也是这几类细胞共同作用的结果。
. ^- `# E5 y/ x7 W; A' T5 [另外，左边那个图是第0天的吗？我从流式图上没看出来刚分离的PBMC的CD3+表达率达到50%以上呀？

张钰0206

细胞的存活率测了吗？NK细胞还需要测一个CD19才能确认吧。流式最先开始电压调了吗？还要做一个阴性对照，结果才可靠。

baby00000003

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2 e9 r( m+ }$ ]+ T  k
% T7 J- @5 j8 a# X  C) G左边那个图是isotype，& U* q! E2 x# h/ E$ p  `& D
当然加过OKT3，不然CIK长的少嘛~今天是D7，CD3+已经上来了，姑且猜测是个体差异吧,或者是实验时加错抗体了-_-......
7 ^6 m& x, r( {- eD0的图没有贴上来....

hsu86

建议到13天是时候再测流式，第四天细胞还没刺激起来，时间太早了
; ^, B5 s5 `1 k3 T+ T我也有过把CIK细胞养成NK的情况，有次做完流式一看80%CD16CD56，不相信又去了一次样，还是一样的结果，太神奇了，具体原因也不清楚