这次的CIK表型有点离谱，求大神解惑

baby00000003

先上图，1 B  u5 L2 R' @% T
" R% s- {! t! V* Q+ P

$ o) S; f  z. ~  T) u, O6 [, X这是培养至D4的外周血CIK" V& w6 V: `& p% O5 M
不同以往的是CD3阳性率很低（图中的FITC）但是CD56阳性率相对较高（图中的PE）
8 g! Q" p' R& h6 U( P% F6 M. ^+ L8 ?3 i; Z' |
D0刚刚分离PBMC时的表型检测，CD3阳性率已经是50%左右，也就是说随着培养CD3的阳性率反而降低了; X) R5 M- Y. s6 l6 s  l6 W
0 h; W) w4 ~/ {  ^) Q7 _
CD56单阳性的会是什么细胞呢？
- Q) r' j; {9 A8 U; kNK？4 s( p4 w8 [. H1 B5 H6 U
但是培养体系中没有加入IL-15不会有什么让NK增殖的东西吧？: \5 I0 }0 r$ Q5 X' l: Y

5 E* n8 J  O+ g( X- K/ L0 R6 _画门时隐约可以画出2个门，其中细胞数较少的P2倒是CD3阳性率靠谱，P1中猜测含有2种细胞，一种是CD3+/CD56-，另一种CD3-/CD56+，也像是不成熟的CIK和NK......& s; W# @! t' B4 b" f! P
; d3 W% B* v  s6 ~" J( C. Z3 }
求大神们解惑，感激不尽~

nailute1985

我估计啊，NK细胞吧……因为NK细胞扩增的话其实不是一定依赖于IL-15的，单纯的IL-2就可以的~

FreeCell

回复 baby00000003 的帖子
) F) U8 d) _/ s8 {
  V: B" b+ }4 g$ ^+ `& b; R嘻嘻，做个同型对照再读结果

cjsbaicai

第四天时间太短，多培养几天看下。另外，CD56一个指标说明不了什么，判定NK细胞的标准时CD3-CD56+，这个你可以把横纵坐标修改下看看。此外你这分离培养的细胞云图太散，而且还分为两群，可以从源头找找原因看

baby00000003

回复 cjsbaicai 的帖子: ]+ Z) Y: E* q6 m( w5 p# E
; n' j6 r& {! V' c" l. v& M
那个图就是说有一群为数不少的CD3-/CD56+呢......- E( n, H$ @+ `8 T9 R
当然至今我也只做过5个样本，这种情况还是第一次......0 j' W0 x) t* f2 L3 v$ @- o
如前辈所说，且养着它看吧~

孙帅帅

D4 CIK细胞还不成熟~   等几天再做吧！

暖羊羊

楼主，我想问你培养CIK的时候加CD3单抗了吗？我们前期做过几次实验，以没有加CD3单抗为对照组的，分别在6d、14d进行流式检测，发现对照组CD3-CD56+细胞比较高，CD3+CD8+、CD3+CD4+比率都很低（应该大部分是NK细胞），扩增倍数也很低；实验组加入CD3单抗，CD3+一直处于95%以上，CD3+CD8+也明显升高。
- w, |4 `4 b& m' |6 a7 rCIK是一群异质细胞，包括CTL（CD3+CD8+）、NK（CD3-CD56+）和Th1（CD3+CD4+），杀伤活性也是这几类细胞共同作用的结果。
; T0 l3 d8 `5 g) @( Q) I5 d另外，左边那个图是第0天的吗？我从流式图上没看出来刚分离的PBMC的CD3+表达率达到50%以上呀？

张钰0206

细胞的存活率测了吗？NK细胞还需要测一个CD19才能确认吧。流式最先开始电压调了吗？还要做一个阴性对照，结果才可靠。

baby00000003

回复 暖羊羊 的帖子4 K5 R! w0 B0 S1 c6 a

) ?' q, Q, ~$ s+ H3 p# l左边那个图是isotype，- B  H  H% K1 D+ l
当然加过OKT3，不然CIK长的少嘛~今天是D7，CD3+已经上来了，姑且猜测是个体差异吧,或者是实验时加错抗体了-_-......
4 I" H& A8 I( A/ _  |* l5 F! TD0的图没有贴上来....

hsu86

建议到13天是时候再测流式，第四天细胞还没刺激起来，时间太早了' z6 l* i- U9 B" S
我也有过把CIK细胞养成NK的情况，有次做完流式一看80%CD16CD56，不相信又去了一次样，还是一样的结果，太神奇了，具体原因也不清楚