谁做过囊胚注射生产嵌合体啊？讨论一下

zpzp0312

1 a! z  n' }! z8 T: f; w7 M% p, W8 l7 J4 D
最近想尝试一下，之前没做过。
8 K$ g/ `! C: N3 {5 D: l7 zES细胞消化后，形成的单细胞不是很多，感觉很多都是连在一起的。所以用注射针吸细胞时很困难。而且经常会在针尖处形成黏连的大团，堵塞注射针。9 j' e1 [) s6 Q4 ^/ e% X1 R% D
并且注射针在使用过程中，在针尖内壁经常附着石蜡油，影响控制。2 b5 {% k& V! |; X+ i5 l4 J  w

2 a/ ~( i2 E: Z" A5 ]! u8 S7 {1 E哪位做过，诚心求教！~~~

懵懂干细胞

学习中

懵懂干细胞

学习中

kiesheep

表示高度赞同“细胞冰浴”

zpzp0312

给你一个建议，把消化后的ES细胞放在冰浴上几分钟，这样可以减少黏连。
; W. r4 H- l3 p& k6 Z( Zghostsolo 发表于 2009-9-5 15:14

/ }( w/ Q# u/ f2 c! P  [冰浴在很多文献中有报道
) g) c4 s4 O5 P它能够增加干细胞的“刚性”，避免聚集成团
9 l+ D7 ?' V+ ~5 g# n- V7 b我们在实验过程中发现，制备好的细胞悬液即使不经过冰浴或低温工作台同样能够达到较好的效果。4 D$ {' A, {$ Q  S2 j/ }
可以考虑省略冰浴！

ghostsolo

给你一个建议，把消化后的ES细胞放在冰浴上几分钟，这样可以减少黏连。

maxiaorongqp

虽然没做过 但也要顶

niyou

WPI玻璃毛细管不用处理就可以进行拉制，
' W" I* k4 E  Y- S) pWPI玻璃毛细管规格：长度10cm,直径：外径1mm，内径0.75 mm
& u1 j' @2 K+ M你说的对，薄壁比厚壁玻璃毛细管好拉好用+ b( [' a) r0 S  s, b
你的拉力参数也许可以，不同的玻璃毛细管需要的参数不一样，需要测试并调整
" P5 S# E( q/ j. t- k5 e* hWorld Precision Instruments - WPI Inc.你上Google去搜，国内应该有代理。

zpzp0312

8# niyou ) K; q# X9 s1 [6 V! A

0 \/ u& G2 d0 ~1 j' ]# f" E& u+ s8 ?
感谢！~~~
+ z. H+ _+ \+ j7 M9 q8 N我们用的是国产玻璃管，其他用品都是大公司的产品。. U  ^7 _2 Q; T  `3 Q
如果用WPI玻璃管，是不是不经任何处理就可以进行拉制？
  G' r* D) ]" b6 X另外WPI玻璃管的规格是多少？/ \8 }/ Y- N, H# q; I: k' X2 E$ z
在拉制过程中，感觉内径0.8mm的要比0.6mm的拉制的针效果好（壁薄）。
3 l9 U6 \3 L2 h' G/ u$ v我们主拉力80，副拉力30
. o1 _1 m! W: B% v5 x5 }
9 M/ u6 w% b* I, N  Q麻烦，给个WPI公司订货的方式吧？！3 F3 x: Q# q, T6 D- s: x7 E/ F" w! \: Q
以前没和WPI打过交道
& R: l% q6 [. r谢谢！

niyou

两点提示：# u+ H  x* a2 D2 U2 s' @
    1、石蜡油是不是购买的sigma (货号8410)，或其它大公司的产品，排除油质的问题。
/ }5 d9 ?' x* {    2、制备显微注射针用的玻璃毛细管是国产的还是进口的，如果是国产的建议采用三步处理法：稀盐酸充分浸泡过夜或大于24小时；蒸馏水冲洗20遍，millipore超纯水洗涤三次；180度烘烤两小时。这样可以彻底去除生产玻璃管时内壁附着的有机物等杂质，减少石蜡油附壁。如果经费充足，建议购买美国WPI公司的玻璃毛细管以制备显微注射针。
( o1 L5 c' F6 c# X2 @% L0 N    3、PVP都是采用10％的.