大家冻间充质干细胞的时候冻存液比例是多少啊？

漂泊的风

建议比例为FBS：DMEM：DMSO=5:4:1，血清贵是贵，但是浓度低的话对细胞有很大影响，甚至使细胞完全不贴壁，相比于细胞来说多用点血清值得

baicaikua

冻存液里最好别加双抗，虽然没做过实验，但是培养基加双抗后细胞生长一定是受到影响的。

baicaikua

* q  ?8 m3 w3 w8 q/ m2 b& A2 M1 t  R

* v7 P! E0 g$ u& G* K8 U: i# O8 y% E冻存液一般是培养基：FBS:DMSO  为8:1:1 。 相关冻存液的论文得出数据。FBS比例越高复苏后细胞活率越好，但如比例超过50%提升幅度会急剧下降，如果有钱的主可以90%FBS和 10%DMSO。如果要求高可以50%FBS+40%培养基+10%DMSO。最经济实用的是培养基：FBS:DMSO  为8:1:1。/ o0 D6 Q% M- C9 r+ j
同时DMOS比例绝对不能超过10%否则细胞活率会大大下降，DMSO比例小于5%细胞活率也会急剧下降。- X: {9 G5 {  ^1 E3 o7 W4 o: U
在一个就是细胞冻存的浓度。如果细胞冻存密度过高也会造成细胞活率下降，间充质干细胞一般是10^6~10^7。超过10^8也会造成活率下降。

daviddow

DMSO是1:10就可以了。

sunnyhuan0629

回复 听不到 的帖子6 t0 F+ r" B3 N$ M: [; m4 u5 V

% {, `4 ]% K, I- U 恩 是一个信号通路ROCK Pathway，这个信号通路有很多调控剂的，包括拮抗剂和抑制剂，可以根据你的需要选择，一般都是小分子化合物，成分明确，结构确定，我们用的是Thiazovivin

听不到

回复 sunnyhuan0629 的帖子4 L% J8 ^( }8 G) U0 b

7 }+ s3 u6 q" n. P求问ROKi inhibitor是啥啊...百度不到啊...

dchingb

建議用商業用細胞凍存液效果很好，凍存細胞數6-7次方/ml效果都很好，如果為了節省FBS費用換得細胞不貼附，反而是一種損失吧!

sunnyhuan0629

回复 听不到 的帖子8 U, s& V* ]  k4 \' }
0 g5 T# A* J  \- l; P
恩，理论上血清比例越高，对于细胞在冻存时候的保护作用越大。这个是肯定的。但也有一个度，因为血清毕竟含有很多不明确的组分，会对日后你复苏之后的细胞状态，和你的后续实验，产生一些影响。因此，可以采用重悬时候添加roki inhibitor等的办法来“曲线救国”啦

暖羊羊

血清是细胞冻存的关键因素，通常我们的冻存液会用血清：DMSO=9:1，或者无血清培养基：血清：DMSO=5:4:1，来冻存MSC，通常细胞浓度是2×10^7个/ml冻存液。

听不到

回复 sunnyhuan0629 的帖子! V1 @8 Y8 n( s% M7 e9 [
; B0 R( ~6 l+ H
我平时用的就是含10%FBS的培养液，然后冻得时候是拿DMEM：FBS：DMSO=7：2:1都不行，如果直接拿平时的培养液加10%DMSO的话，血清比例不是更少，那不是对细胞更不好么...