新手养人胚胎干细胞，问题多多，求大神们解答~

woshizh

1.matrigel  铺半小时以上就能使用
% T1 k5 c0 W7 s; M8 n+ ]2.用E8养的hESC  理论上EDTA可以消化后直接传代，不需要离心，James的实验室是这样传的，但身边很少有人能用EDTA很好的传代
  \/ V4 m; B' O- r8 f+ Z1 c  一般还是用dispase或胶原酶IV 消化3min左右见细胞边缘卷边亮起，弃酶，换基础液轻吹一次再用枪头把细胞刮下来6 Q0 r; r* f; O3 o
3.离心800rpm 3min 弃上清  然后E8重悬，重悬的时候 轻吹，吹一两次散开了就行，一般不超过4次