脐血培养的CIK到第七八天就长不扩增了

小跑

      实验室做了几年的外周血CIK细胞，长的很好。流程为枸橼酸钠抗凝采血，D0天加干扰素，D1加混合因子，外周血长的很好，但是用脐血就长不好，一直没有找到原因。脐血采血量一般只有30ml左右，抗凝剂有28ml。曾经怀疑过抗凝剂枸橼酸钠混合在血浆中，培养时添加了这样的血浆是否会因枸橼酸钠络合钙镁离子而影响细胞生长。后改用添加胎牛血清或其他外周血血浆培养（仅实验），几乎没有效果。十几份脐带血，只有一份脐带血细胞增殖特别快，其他都停止扩增。有没有做过这方面的培养的给分析一下，谢谢!

奇幻雪蓝

上图

小跑

回复 奇幻雪蓝 的帖子; H' l2 ^' s, a3 c
3 ^" K5 T6 d4 e6 i
图忘了拍下来，跟平时培养的外周血没什么区别，第一天第二天细胞贴壁，第三天成悬浮的细胞集落，脐血在刚开始的五六天状态是很好的，甚至比外周血还好，一天补一次培养基。但是到第七八天开始，细胞就不怎么扩增了。补加细胞因子也不再增殖。

suning5

培养基问题。国产培养基有个通病，批次间不稳定。

zhrt

回复 小跑 的帖子
' D8 j4 E. i5 F, J8 L1 B# d- \! z; C- X) Q) q
外周血来源的养的怎么样？用的一样的培养液吗？脐血来源的应该比外周血来源好养，长得也应该快！

luyue6453

回复 小跑 的帖子
' q! T* R) l- v' _) i! d$ q, L0 \2 |. Y8 m; Z3 }2 H& c/ j  b6 S' y
我只遇到过脐血一开始就不长的情况，一开始培养就不怎么增殖，有时培养五份，只有一份能长，但是一般长起来的后期也很好啊，要不长的前期就不长了。你再试试吧。

spring1221

回复 小跑 的帖子
% k+ S# \7 `  S. }
' k; O9 |  h7 e因为采血对象多为肿瘤患者，外周血分离的单核细胞活性不如脐血分离的单核细胞。如果外周血分离长得很好的话，培养液或者流程是没有问题的，那就只有考虑脐血的量和培养过程的控制。一个是脐血最好能达到50ml以上，再就是加液可以改成隔天一加，根据培养液的颜色变化来考虑是否加液。cik是一种聚集生长的细胞，量太少还一直加液的话可能是导致后期不再生长的原因。

维维睡啦

培养流程感觉没问题，初始培养数量你们有计算吗？少的话不利于培养，初始数量建议在0.1*10^8以上。你的细胞培养我感觉有下面几个小问题：
5 L0 K# v, j0 g! G3 r8 ^& N1、脐血量太少，所提的细胞数肯定也少，基数少，不利于细胞的扩增。
* z% J! \. j2 `+ E' g2、血与抗凝剂比例，抗凝剂有点多。会影响细胞分离。0 H6 B% N9 n$ ]* `( a$ }. }7 K0 l. x* N
3、如果是免疫细胞培养，抗凝剂建议用肝素类抗凝剂，在提单个核时对细胞影响小。( |" [3 u; @& X+ }

小跑

回复 suning5 的帖子2 U! v2 s; B) j6 i2 R1 U
! P' G2 {, t- m- G" m; e
用的是TAKARA的551，培养基没问题。而且培养外周血也没问题。

小跑

回复 suning5 的帖子
( ?0 x# M; o- q8 l/ z3 C/ j+ g& s' S4 T( c1 |- G& N$ l6 u
用的是takara的551，外周血来源的培养的很好