脐血培养的CIK到第七八天就长不扩增了

Ivan0108

脐血细胞生长不好几个原因：
7 X9 Y8 Y7 |- N# [1、枸橼酸钠抗凝剂采血没有什么大的影响，关键是采血时间带分离不能超过12个小时，5小时以内最好。& R& Y$ w- B+ V2 {& `
2、采血量建议增加，加抗凝剂一起70-80ml为宜。低于50ml的一般很难培养起来，除非采血时间在5小时以内。4 g4 C4 B, G3 W6 [
3、细胞接种密度，一般推荐2-3*106/ml最好，接种密度太低会导致细胞生长不良。
& [1 g6 ?% }. \0 W% }4、目前推荐使用培养基种类：gibco、lonza  ，美天旎，corning，日本研究所ALY等细胞均可正常生长。
) R- P9 Z5 d. U2 k- e5、细胞装袋、加液密度：刚开始接触，建议装袋前测密度 保证装袋后细胞密度在0.3-0.8就可以了。 每次加液时，建议计算密度，保证加液后细胞密度维持在1.0-1.5最好。

Ivan0108

1.采血时间最好小于8小时。 超过10个小时以上的血培养起来增殖比较困难。基本10个小时内的血，我们重来没遇到过长不起来的。脐血30ml，实际培养到14天CIK细胞总量一般都在60-80亿之间。3 a; J9 f7 D" u$ h* ~; V2 x
2.仅仅是做CIK细胞培养，抗凝剂差别不是特别大，几种抗凝剂我都用过几千次了，细胞状态都差不多的。' G4 }0 N( ?+ h) Q: O' m  ~
3.分离出来的PBMC接种密度一定要注意，最好在1-3*106/ml，密度太小细胞生长肯定不好。 如果得到的PBMC比较少，那就接种体积小一点，等第三天了在分瓶放一天细胞量起来了再操作。
# ]7 K8 Y0 L+ w8 A# x; A  L4.培养过程中不要每天加液，最好是隔天加一次。加液时，一定要根据细胞密度进行。一次加多了，细胞生长就会慢很多，加太少细胞营养跟不上。