求助：关于质粒转染

weiyepan

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% n) X4 V" U  M. r1. 一般环状DNA在细胞内能维持3天以上，线性化的DNA有整合的概率，但是能维持的时间比较短。整合的不在瞬转的讨论范围之内。
1 O+ t* G8 d3 g# G4 K" f+ \2. 考虑细胞分裂对DNA的稀释。细胞分裂的越快，稀释度越大，背景蛋白就越多。' w& x. a0 M0 J/ R- u
3. 所以蛋白的表达曲线以单个细胞（相同背景）计算，其实是一个抛物线。一开始DNA多，mRNA也稳定，表达水平相对较高。随着DNA的稀释，表达速度开始下降。降到什么时候到底，主要是看蛋白的降解速度，蛋白稳定的，可以维持15天以上（例如荧光蛋白），蛋白不稳定的，也差不多有5天（例如萤光酶素）。蛋白不会降解的，一般会对细胞造成影响，造成细胞死亡。

weiyepan

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; ^% @3 B5 ~+ s0 H
7 a. w2 `( X3 M质粒整合传代不稳定的，尤其是需要整合率比较低的情况下，传代容易丢。整合率低的普遍比整合率高的的长的速度快，传代次数越多，整合率低的占比会越来越重，蛋白表达量就会越来越低。转染能转进去的细胞种类最多只有30%左右，病毒能远远高于这个比例。另外电转也是有极限的，质粒大一点就进不去，容易把质粒电降解。

yinchong42

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; l( a: B3 w; C8 y+ a; M
5 u3 ~5 D6 i- K) B3 t4 a非常感谢您的帮助，其实稳定转染的话肯定还是病毒更靠谱，但我们也在考虑用质粒转染看看能否用G418筛选然后用做体外实验，体内实验的话我们的蛋白需要很长时间才能发挥作用，所以我们设计了五次注射，每次间隔15天，目前已经进行了两次，但我看别人的文章上最多也就是给两次作用，不知道质粒注射次数过多会不会有什么不好

weiyepan

回复 yinchong42 的帖子5 K% R2 T0 z7 i# g

6 P; Z4 {0 U4 m8 {9 ^4 B质粒注射你确定不会引起免疫？

yinchong42

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; N, ~  V1 S' k2 Y; r' n5 q* ^5 D- I7 I' `& T
目前只有注射带有表达蛋白的质粒会引起脾肿大，mock组未发现问题

weiyepan

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5 C& a2 w+ t+ ]: T
! @8 x& D% h9 k: f6 F你注射到什么位置啊？

yinchong42

回复 weiyepan 的帖子+ l6 X0 [7 L$ A! s. w+ Q( o* u* k

( _0 n/ q* N5 E% f4 ?你好，不好意思没有及时回复，我注射的是颅骨皮下，现在问题已经解决了，少量注射和mock组是不会导致脾肿大的