求助：关于质粒转染

weiyepan

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1. 一般环状DNA在细胞内能维持3天以上，线性化的DNA有整合的概率，但是能维持的时间比较短。整合的不在瞬转的讨论范围之内。
6 Z; U+ a5 d! u: R0 Y2. 考虑细胞分裂对DNA的稀释。细胞分裂的越快，稀释度越大，背景蛋白就越多。
% w* o1 N8 @9 q( u7 _" D3. 所以蛋白的表达曲线以单个细胞（相同背景）计算，其实是一个抛物线。一开始DNA多，mRNA也稳定，表达水平相对较高。随着DNA的稀释，表达速度开始下降。降到什么时候到底，主要是看蛋白的降解速度，蛋白稳定的，可以维持15天以上（例如荧光蛋白），蛋白不稳定的，也差不多有5天（例如萤光酶素）。蛋白不会降解的，一般会对细胞造成影响，造成细胞死亡。

weiyepan

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3 s2 Y' O' p0 t8 P  d4 b
( s7 F6 E) f$ U  F质粒整合传代不稳定的，尤其是需要整合率比较低的情况下，传代容易丢。整合率低的普遍比整合率高的的长的速度快，传代次数越多，整合率低的占比会越来越重，蛋白表达量就会越来越低。转染能转进去的细胞种类最多只有30%左右，病毒能远远高于这个比例。另外电转也是有极限的，质粒大一点就进不去，容易把质粒电降解。

weiyepan

回复 yinchong42 的帖子9 B% M2 F! n8 ~
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质粒注射你确定不会引起免疫？

weiyepan

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& [, f, P( _8 z4 ~- u1 U你注射到什么位置啊？