请教流式达人帮忙看图

baby00000003

先上图
! |7 v8 d6 Q) Z8 ~

2015-5-21 14:18 上传

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$ e, q; o* ~& g3 h( |

2015-5-21 14:18 上传

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1 M5 [# C. E# C" h
这是同事做的1个CIK细胞样本，培养时间、条件、制样过程一概不清楚
, a( D* ^4 H  P, v想请教各位有经验的老师们，为什么图上的细胞没有明显的CIK分群呢？: @( W0 d  H4 W# w+ z5 @
图上圈绿色的一群是为数甚微的CIK么？5 I* x: W3 b6 A9 m- o: D9 g& s
图上红色的一群应该是细胞碎片吧？7 l4 B- L" Q8 \- W$ r& |
那图上蓝色的一群又是什么？$ M3 L* ]: t: ^  o  t1 J) H! P

+ ~- |  d. P$ t1 N追加信息：& H% `  s6 O3 @3 i7 U+ t) n
1，右边的图是CD3-FITC／CD56-PE的双标荧光，据说圈中图上蓝色一群几乎没有任何阳性荧光
/ q. ]5 J+ ~0 ~1 Z2，镜下观察细胞有非常明显的老化形态，如边界不圆滑，颜色暗淡。即使形态尚好的细胞也看不到分泌颗粒
9 e/ C6 b8 R/ T$ e& H4 e3，细胞来源为健康的年轻人，无不良嗜好，采血前无饮酒、服药等行为
4 U7 ^. y( E$ |+ K9 r4，采样时间为培养开始后的D14( ^. d* j# x, q' J

- Y6 U* g9 h9 p2 c# F. \( T麻烦各位老师帮忙解答～

元杰5

能先做个荧光补偿吗？……红色圈一般认为是碎片，绿色圈没有明显的参考价值，

Jonathan

SSC-A跑出去了好些。下次电压可以调低一点。

baby00000003

回复 元杰5 的帖子) ?( V( N0 w* N$ k& M$ u  ~

$ L7 K( h* g# L( v' m- `据说就是这个绿色的圈稍微有点各种阳性，多谢解答，俺会及时转告滴～

元杰5

回复 baby00000003 的帖子* g1 T; T  F% x* m) P3 Y

' s! G. _6 g4 S9 a: n我看的话，FSC/SSC图只表明细胞的大小、粒度等特性，跟是否表达某表面抗原没有关联

ccst4838318

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3 `1 a8 {0 S8 F- O& \1 `. J% F6 _4 ?; S& B# g
绿色圈就是CIK大概的检测范围了，但是你这也太少了，基本上全是转化成其他淋巴细胞了，调下补偿和电压吧，效果图或许会好看一些，但是单看图片，你这DC-CIK诱导的效果是很不好，检测出来估计连10%都不到吧

lccsiais

嘿嘿，散射光图上圈了门，你FITC-PE图上也没有把绿色门的细胞单独显示出来，不好判断。另外图上阴性细胞群顶上那黑色细斜条都是死细胞/活力不佳的细胞，看样子这部分也太多了点。可以加个DAPI，sytoxblue什么的（405nm激光激发），染一下死细胞，把它排除（绝大部分）。
5 p! q5 R3 ?0 v! {" D不知道这是怎么测的，用561nm激光激发PE，不受FITC干扰，几乎无补偿了。

baby00000003

回复 ccst4838318 的帖子+ P6 F* ]. j/ F1 f0 K& ~( A
5 E2 ]9 a; Q# R0 q2 V& J$ n' h; i
多谢解答，俺会第一时间转告～

baby00000003

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6 T1 U/ d9 W: B5 ~- O' V1 k$ A, O0 B& R( b- F# x/ R- o
多谢解答，俺会第一时间转告～