请教各位专家老师培养CIK为什么出现这种问题

hyg5481655

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5 y# R: b. |- @& f; L! U( F! V( v$ r5 ?3 W
本来是不打算这么早测流式的，是因为D14天的CIK流式结果不好，我们打算溯源到前面几天看看从第几天开始不好的，所以隔三天测一次。我们要求培养周期不能太长，顶多到14天，还要保证细胞数目和双阳率和活率，请问您培养到后面（D14）的细胞有多少？活率呢？

小梓莜

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- w9 R1 m8 Q4 W2 s, [7 I& f% j7 J/ \1 v. O) X9 H4 z: h  w
D6天测流式会不会太早了，不知道其他大侠们是第几天测流式的，我做的D11天测流式双阳在19%左右，培养时间越长，双阳性越高，当然也要考虑细胞的活率。

hyg5481655

回复 suning5 的帖子
+ R0 l/ o) y& z5 x+ W
$ I$ Z* ?, c1 l" c9 f# d0 _谢谢赐教，我们后面会尝试增加量，CD3单抗不足应该也不会产生大量死亡的问题吧？我们换了一家国产的CD3单抗再试试结果怎样。

hyg5481655

回复 suning5 的帖子
3 C+ v" v) P2 ~; s
% V' d/ D- O& ]% Z谢谢赐教，最近重新买了CD3单抗，之前买的Peprotech的怀疑失效了，时间关系我们又买了份国产的，不知道结果怎样。

hyg5481655

6 K: H/ G7 T% l) b2 ~' o
- X7 ?' {2 ?% z5 K, T' [7 |回复 fou321 的帖子
9 d. ~+ M( U; H) G% H6 w% g1 M* V, D  y! f. k3 Z: J
感谢您指教，我们也知道正常情况下加血清肯定要好，可是一段时间之前的结果告诉我们即使是无血清也会比我们这种细胞都死掉了的情况好，所以我们觉得血清是锦上添花的作用，可是我们连“锦”都做不出来了...。所以从因子和培养条件着手，看看是不是因子失效了或者CO2浓度不够了。看到您的回复应该经验相当丰富

suning5

CD3太少了啊。200-400ng/ml，比较好。不用一直加。

fou321

直接无视我的回答，看的我都着急。
5 r2 v8 ?. w; e, m  I9 M& g你加血清试试，5%、10%、随便你加。- O  }1 r4 b, d6 c8 Q. m: ?- L: Y& h! `
不要再问为什么，因为我做过实验对比过。
+ p  O! A; x. B% N3 B8 ^3 {- s* T7 J什么CD3，IL-2浓度，只要你加了 浓度不差太多，没影响的。

hyg5481655

回复 yuanyecat 的帖子8 I7 S! e5 A$ J) [2 x8 p5 ~/ E8 ^, d
6 R/ n2 ?- o1 T: Z* Y; n8 a
对的，没什么双阳细胞，健康人的血，没有经过IL-2等因子动员，D0的时候我们就看到没什么双阳和NK细胞，由于没有研究过人血，当时觉得可能正常，但是直到D6都没看到什么双阳细胞，所以就比较奇怪了。会不会是CD3单抗失效了？

yuanyecat

你的CD3CD56双阳细胞不多啊

hyg5481655

回复 luckyliu 的帖子/ `6 U5 Q5 @8 U# `' X" Y

; @$ H% @2 K! e/ S. j老师您好，你说的细胞刺激不够是CD3单抗量少吗？我们用50ng/ml，还是IL-2（300IU/ml）?菌检没有问题