求助ips复苏的问题

冬天的雪糕

我们现在用的小鼠mef饲养层，复苏is细胞，但是两周了细胞都没有长起来，只有一两个克隆，而且克隆一直没有生长。& ]0 N) a- e9 M. X- W& u) c
有没有大神试过用饲养层复苏，而不是无饲养层培养液？有什么注意事项或者建议吗？7 z/ N1 j7 [! s- n7 `
非常着急！！

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: S$ q) e5 r/ F; [& f% Y
7 F. E% ?% |# z- j/ D( U冻存的细胞状态还是不错的。y27632没有加，下次准备加了试试看。饲养层密度还可以，是天天换液。现在看来有可能是把细胞打散了，请问稀释冻存液加3ml每管可以吗？离心转数和时间请问应该是多少比较好呢？万分感谢

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mef的问题应该基本可以排除。我没有加y27632。细胞是吹散的。请问复苏时应该把克隆打散吗？离心时间转数应该是多少呢？还有就是请问y27632的浓度应该是多少呢？是不是加到培养基，直到克隆状态良好，在更换培养基？

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mef的问题应该基本可以排除。我没有加y27632。细胞是吹散的。请问复苏时应该把克隆打散吗？离心时间转数应该是多少呢？还有就是请问y27632的浓度应该是多少呢？是不是加到培养基，直到克隆状态良好，在更换培养基？

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mef的问题应该基本可以排除。我没有加y27632。细胞是吹散的。请问复苏时应该把克隆打散吗？离心时间转数应该是多少呢？还有就是请问y27632的浓度应该是多少呢？是不是加到培养基，直到克隆状态良好，在更换培养基？

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mef的问题应该基本可以排除。我没有加y27632。细胞是吹散的。请问复苏时应该把克隆打散吗？离心时间转数应该是多少呢？还有就是请问y27632的浓度应该是多少呢？是不是加到培养基，直到克隆状态良好，在更换培养基？

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4 @* ~+ @( G$ g3 |, J2 `0 d4 {2 z8 F3 gmef的问题应该基本可以排除。我没有加y27632。细胞是吹散的。请问复苏时应该把克隆打散吗？离心时间转数应该是多少呢？还有就是请问y27632的浓度应该是多少呢？是不是加到培养基，直到克隆状态良好，在更换培养基？

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回复 nichifanlema2 的帖子; ~4 {7 u! I, M* t- y- K

; y! h5 `7 z, y非常感谢您细心的解答！% t" o, t* v9 X4 |* S% m) E5 Q
请问除了y27632还有什么可以提高复苏率吗？mef密度问题，一个t25大概多少比较合适呢？

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, `: j5 C. o: O' K8 Z' M谢谢。feeder的话，是不是一般一周就要更换新的，请问你一般复苏后多久就传代了呢

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回复 wangshumin12311 的帖子6 r9 a6 y0 k+ P( C3 ?

7 S$ m( o: p  C" o* c) G* o0 }$ c比较省钱，嘿嘿