求助ips复苏的问题

冬天的雪糕

我们现在用的小鼠mef饲养层，复苏is细胞，但是两周了细胞都没有长起来，只有一两个克隆，而且克隆一直没有生长。
; L. u8 V: I7 j: a/ H有没有大神试过用饲养层复苏，而不是无饲养层培养液？有什么注意事项或者建议吗？
- B2 |6 L  o& l' q8 K3 U4 [  J# d* A非常着急！！

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冻存的细胞状态还是不错的。y27632没有加，下次准备加了试试看。饲养层密度还可以，是天天换液。现在看来有可能是把细胞打散了，请问稀释冻存液加3ml每管可以吗？离心转数和时间请问应该是多少比较好呢？万分感谢

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% ]! u1 s! ~9 X; H) gmef的问题应该基本可以排除。我没有加y27632。细胞是吹散的。请问复苏时应该把克隆打散吗？离心时间转数应该是多少呢？还有就是请问y27632的浓度应该是多少呢？是不是加到培养基，直到克隆状态良好，在更换培养基？

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mef的问题应该基本可以排除。我没有加y27632。细胞是吹散的。请问复苏时应该把克隆打散吗？离心时间转数应该是多少呢？还有就是请问y27632的浓度应该是多少呢？是不是加到培养基，直到克隆状态良好，在更换培养基？

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mef的问题应该基本可以排除。我没有加y27632。细胞是吹散的。请问复苏时应该把克隆打散吗？离心时间转数应该是多少呢？还有就是请问y27632的浓度应该是多少呢？是不是加到培养基，直到克隆状态良好，在更换培养基？

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# u" W1 o+ j, Z0 T* F! K1 y非常感谢您细心的解答！0 t) r; M2 p+ ]
请问除了y27632还有什么可以提高复苏率吗？mef密度问题，一个t25大概多少比较合适呢？

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谢谢。feeder的话，是不是一般一周就要更换新的，请问你一般复苏后多久就传代了呢

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回复 wangshumin12311 的帖子! ]9 S# `& P3 j1 r/ k! S9 g
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比较省钱，嘿嘿