脐带间充质干细胞难以消化

chrindy

       之前自己取脐带提了脐带来源的MSC，在培养皿内当一个克隆密度达80左右就开始消化，因为以前消化MSC用的都是0.05%的胰酶（含EDTA），这次也是，但是发现MSC很难消化下来，最后能消化下来种到培养瓶内的细胞数目比较少，不过细胞状态比较好，也能长起来，后来就改用0.125%的胰酶（含EDTA）进行消化传代，发现还是需要比较长的时间，是因为我的细胞状态不好吗，还是说脐带提的MSC本来就比较难消化？

chrindy

有用PBS洗两遍，胰酶也复温到37度了，看起来只能是细胞纯度不够的原因？可是形态上看起来都还好，到时候跑个流式看看，希望是MSC

chrindy

回复 nkcell 的帖子  u- g  J0 R8 e. O2 y/ q

: v% y$ Q! v8 g! @4 {没怎么延长消化时间，可是消化下来的细胞状态也不好，加了生长因子也长好慢，还有一瓶开始长肥，怀疑究竟是不是MSC了

chrindy

回复 ych123 的帖子
7 |- o, \% i! K5 M5 c) d; A) A9 }! w* I, X0 D
我最近养的细胞状态都不怎么好啊，你是自己提的MSC吗？？圆形细胞可能是杂细胞？？我同学之前试过同时养两种细胞，可能操作的时候没注意，感觉另一种细胞混进MSC里面了，养着养着MSC就被那种细胞淘汰了...

chrindy

回复 帝国黑骑士 的帖子2 T% o- s: F- V! k2 k' d

4 J; d  t: |& `" t- P( \一般我都是用0.05%胰酶消化也挺容易的，这批不好消化的MSC后来长得很慢，开始变肥大，感觉可能是我有一次差不多长满才传代所以后面状态都不好了，真的不能抱有侥幸心理啊...

chrindy

回复 nkcell 的帖子- {1 n' b. Z7 T# @: M, r! [+ s
/ M& t+ ^: C7 B5 {3 m2 B& ]( f& z
我是自己提的脐带MSC，可能不是很纯，想问一下大家都怎么避免内皮细胞混杂进去啊，我觉得刮也刮不太干净

chrindy

回复 ych123 的帖子2 {% h3 e* O; @3 L; g* M. j

; _7 Q4 q8 }: s$ ~状态好的MSC很容易消化，用0.25%胰酶的话动作要快，不然很容易消化过头影响细胞活性，我看一般大家消化MSC都用0.05%或者0.125%的胰酶，我用0.05%胰酶消化个30秒左右也就差不多了