ES细胞形成的拟胚体EB免疫荧光染色方法求助

最大的疯子

大家好，我现在需要对胚胎干细胞悬浮培养形成的拟胚体EB直接进行免疫荧光染色，总是染不出来，希望各位有人做过的能够提供帮助！谢谢！
% j" w& k+ O! w8 {: ]我的染色过程为4%PFA固定30min，0 p: Y. Z4 g! Y0 m
PBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min。
+ d4 d* N6 \! ?5%BSA/PBT 封闭2h: c$ j1 f& `& d. L! m( Z% C/ r) P5 y
5%BSA/PBT稀释的一抗4度过夜6 n% ]2 j2 {, m5 T# E/ C8 I
PBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min
5 U3 l2 y4 q: L9 i2 H9 H5%BSA/PBT稀释的二抗4度过夜* U6 y) Y, x4 |, ^( J) i
PBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min
. ]9 ?* {# p/ ]4 y8 |7 z荧光照相。
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9 F$ a' W8 G* i/ J7 B0 _4 H

千细胞

不知道你是要染什么抗体，EB这样一个球体的话做这样的染色不太好做，可以考虑收集EB做切片后再染色，这样效果会好一些。

最大的疯子

回复 千细胞 的帖子( k1 N. G5 S( N
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谢谢，我是要染gata6

未来之星

将EB石蜡固定后，做组织切片，然后染色，这样肯定不好染吧

HXJ1989

染色后共聚焦拍照会不会好些？