ES细胞形成的拟胚体EB免疫荧光染色方法求助

最大的疯子

大家好，我现在需要对胚胎干细胞悬浮培养形成的拟胚体EB直接进行免疫荧光染色，总是染不出来，希望各位有人做过的能够提供帮助！谢谢！
$ e! |# G1 }7 H+ e: `我的染色过程为4%PFA固定30min，
" G: r+ j$ e& v" e' K. @PBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min。' d8 H3 n0 a/ _
5%BSA/PBT 封闭2h
; O0 h8 C. R) u5%BSA/PBT稀释的一抗4度过夜( S$ m0 x6 `& q
PBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min
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PBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min
+ g6 a- X7 |6 t4 d: H6 r0 L荧光照相。/ {( y3 _  U0 a# Y2 e' }2 n
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千细胞

不知道你是要染什么抗体，EB这样一个球体的话做这样的染色不太好做，可以考虑收集EB做切片后再染色，这样效果会好一些。

最大的疯子

回复 千细胞 的帖子0 a, ?. F' o: {% m4 R

7 j9 l& J. I0 f: _0 [& c2 B谢谢，我是要染gata6

未来之星

将EB石蜡固定后，做组织切片，然后染色，这样肯定不好染吧

HXJ1989

染色后共聚焦拍照会不会好些？