ES细胞形成的拟胚体EB免疫荧光染色方法求助

最大的疯子

大家好，我现在需要对胚胎干细胞悬浮培养形成的拟胚体EB直接进行免疫荧光染色，总是染不出来，希望各位有人做过的能够提供帮助！谢谢！7 u; [# y4 F/ D
我的染色过程为4%PFA固定30min，
6 L3 [3 p2 U* \# h% vPBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min。/ E! M0 p  t3 r
5%BSA/PBT 封闭2h
% v" n7 D5 Z" `; I5%BSA/PBT稀释的一抗4度过夜
! s. S' A7 ]( [! j7 h9 d6 vPBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min! `" Q$ g1 d% g$ ?* F
5%BSA/PBT稀释的二抗4度过夜/ f4 o9 O5 P& X3 E5 v! c3 E0 L, C
PBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min2 j8 V& @6 `1 F
荧光照相。; \2 |2 l$ P% v! N: v3 \0 m9 W

& f- L) J0 r0 W8 V3 ]

千细胞

不知道你是要染什么抗体，EB这样一个球体的话做这样的染色不太好做，可以考虑收集EB做切片后再染色，这样效果会好一些。

最大的疯子

回复 千细胞 的帖子
$ b: A0 n6 \. [2 {! q. a; N7 Q
, E0 o, R" {5 O) q7 |) H0 _! A谢谢，我是要染gata6

未来之星

将EB石蜡固定后，做组织切片，然后染色，这样肯定不好染吧

HXJ1989

染色后共聚焦拍照会不会好些？