ES细胞形成的拟胚体EB免疫荧光染色方法求助

最大的疯子

大家好，我现在需要对胚胎干细胞悬浮培养形成的拟胚体EB直接进行免疫荧光染色，总是染不出来，希望各位有人做过的能够提供帮助！谢谢！! @( U4 P$ [: H$ n  W" y
我的染色过程为4%PFA固定30min，
* T% d3 K5 B, @8 u7 U5 B# MPBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min。
, u: ?$ d: s$ c8 n3 Z5%BSA/PBT 封闭2h- U4 s: B1 v9 W( E( W, ]* B
5%BSA/PBT稀释的一抗4度过夜
5 ~* {2 r( O! D5 p3 u5 G& ^PBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min( ~) Q' Y3 s9 Y
5%BSA/PBT稀释的二抗4度过夜, J  ^: f9 J! [& |, ]: W
PBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min
* h) n& A. ~4 d- q5 s3 [: s% U荧光照相。
! X8 c& d. b( u
2 A7 H6 z% K5 h9 I7 |3 j9 A

千细胞

不知道你是要染什么抗体，EB这样一个球体的话做这样的染色不太好做，可以考虑收集EB做切片后再染色，这样效果会好一些。

最大的疯子

回复 千细胞 的帖子3 a5 p6 ~4 W& w& Q6 W) n" G

. X7 I% Q/ c' @0 n* O谢谢，我是要染gata6

未来之星

将EB石蜡固定后，做组织切片，然后染色，这样肯定不好染吧

HXJ1989

染色后共聚焦拍照会不会好些？