ES细胞形成的拟胚体EB免疫荧光染色方法求助

最大的疯子

大家好，我现在需要对胚胎干细胞悬浮培养形成的拟胚体EB直接进行免疫荧光染色，总是染不出来，希望各位有人做过的能够提供帮助！谢谢！' o7 {; L2 m5 f+ V" N
我的染色过程为4%PFA固定30min，
& s( |" x- O4 U$ ]# S! G" @PBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min。( Z& o* Y- Y% F
5%BSA/PBT 封闭2h
' |: h, H5 b* }& B5%BSA/PBT稀释的一抗4度过夜2 _7 J6 O) ]' }2 y, }& x& i) l
PBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min
1 i8 I1 C; G$ N- u( x  V0 ?5%BSA/PBT稀释的二抗4度过夜
8 U/ O8 ?3 I' j1 y3 [PBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min
  T; n. _4 u5 Q/ D  g8 S  c7 N荧光照相。
  z, w$ [9 M. A( V( ~# z) K+ ?( U7 D( \, h

千细胞

不知道你是要染什么抗体，EB这样一个球体的话做这样的染色不太好做，可以考虑收集EB做切片后再染色，这样效果会好一些。

最大的疯子

回复 千细胞 的帖子
5 k2 x2 i3 ]6 t( z- j& R1 p  f5 k- q+ ~* J% P* Y
谢谢，我是要染gata6

未来之星

将EB石蜡固定后，做组织切片，然后染色，这样肯定不好染吧

HXJ1989

染色后共聚焦拍照会不会好些？