ES细胞形成的拟胚体EB免疫荧光染色方法求助

最大的疯子

大家好，我现在需要对胚胎干细胞悬浮培养形成的拟胚体EB直接进行免疫荧光染色，总是染不出来，希望各位有人做过的能够提供帮助！谢谢！- c2 O5 I  `4 X0 ^6 R8 p, t
我的染色过程为4%PFA固定30min，- b8 ~3 U7 U& q, h- R( g" T  M+ n
PBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min。
0 e, y9 K+ U/ s$ D. s- y' h5%BSA/PBT 封闭2h
! ~, \6 B" r  Y7 s4 t5%BSA/PBT稀释的一抗4度过夜5 @5 a( U1 T- W5 T2 d6 V
PBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min
3 B* O$ r, `# v! ]5%BSA/PBT稀释的二抗4度过夜
# n8 y; h/ c( B2 L6 kPBS/0.5%triton x-100（PBT)洗三次，每次10min2 l7 B1 v! m# ^% B5 x8 ]! V0 k
荧光照相。7 x( n' X# [( u/ Z

8 z$ n! x7 x$ ]% F# E- |# B8 g, C

千细胞

不知道你是要染什么抗体，EB这样一个球体的话做这样的染色不太好做，可以考虑收集EB做切片后再染色，这样效果会好一些。

最大的疯子

回复 千细胞 的帖子
7 I& _  q( W1 G2 z" }$ x& a' _/ N6 `( j, N. r
谢谢，我是要染gata6

未来之星

将EB石蜡固定后，做组织切片，然后染色，这样肯定不好染吧

HXJ1989

染色后共聚焦拍照会不会好些？