间充质干细胞传代时细胞成片脱落是怎么回事？

309208770

最近一段时间养的间充质干细胞在传代时总是遇到消化后成片掉落的问题，无论细胞融合度百分之八十还是百分之百都有这个问题，加入gibco胰酶后放入培养箱三分钟左右，镜下观察细胞都缩成圆形，可是拍打后不是呈细砂状脱落，而是呈一张皮似的整片掉落，敲打能稍微散开一点，但是解决不了问题，就算再多消化两分钟也还是这样的情况，培养瓶用的是175cm2的，corning和nunc的都用过，都存在这样的问题，培养液用的是达科为，添加物是HELLOS,另加GLUTAMAX，以前用的都是自己配置的试剂，从没有这样的情况发生，现在的试剂高级了，竟然出现这样的问题，请各位专家帮我看看这是怎么回事，怎么解决？

nkcell

细胞状态不是很好的时候会出现这样的现象，还有这时候的细胞表面标记物你先测测，如果细胞不好了就直接扔掉吧

水念人倦

片状脱落。。。为什么我第一反应是污染。。有没有污染的症状呢？培养基颜色什么的？

蜗牛爱贝贝

片状脱落   首先想到的是 悬浮细胞  过多时，沉到底部的现象  因为间充质干细胞没有遇见过这种情况，就像楼上说的，你先确定有没有污染，在没有污染情况下，你做个流式检查检测，如果细胞不行了就扔掉吧，在这我在消化是，并没有在37度，而是在室温情况下 2-3分钟就可以顺利消化下来的

saier.HK

是不是你消化过了？你缩短消化时间和消化液浓度再试试。

woshibotao_01

你消化完再接种 细胞长的怎样？下次消化时你试试缩短一点时间。然后测测细胞表型。

daiying5200000

我以前也碰到类似的现象，不过我的目的就是要让它成片状。我之前养的是脂肪干细胞，发现细胞在营养丰富的状态下容易连成一片，不需要用胰酶消化就可以直接用刮刀取下片状细胞群。
: ^5 X5 `1 d! Z( u- q6 w& x$ \6 E当然我的目的与楼主可能不同，我当时求两点：第一，不能用胰酶消化，文献报道胰酶消化促进细胞分化，所以很多时候干细胞培养用挑克隆的形式。第二，希望得到成团的细胞，我希望细胞呈团状，转入生物反应器呈三维生长，共聚焦显微镜观察荧光染色的细胞团发现，细胞团内部的细胞出现变化，而且是往我所需要的方向转变，更加适合我的课题。很多时候，呈片状的细胞常常被我们用来做ECM培养板，只需要脱细胞，保留细胞外基质即可，可以作为在细胞移植前的模拟生长，培养板上更加有利于观察，染色，生化分子分析。1 H" O% e8 k3 }2 {, R4 M% x) k( u* W4 w
建议楼主根据自己的需求来看待，也许是你采用的高级培养基使细胞发生了变化，细胞外基质连接紧密，干细胞表面很粗糙，成纤维化之后细胞表面光滑，但是细胞间的连接还是很紧密的，可以做流式分析，如果发现不能维持干细胞特性，建议多试几组细胞采用不同浓度添加物培养观察下。

309208770

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) ^( g- B( b/ B绝对没有污染，

yahooyeah

回复 309208770 的帖子9 O: j: C8 O# h' K

: g* k+ ~' i# w& q. A. j我当时遇到这个问题就直接扔掉重新复苏了

pcljsw2008

片状脱落一种可能是密度过高，另一种可能是培养基问题，之前我买的现成的高级货就不脱落，现在自己配的，密度上不去，容易掉，特别是边缘地带