想做间充质干细胞分化成骨成脂成软骨实验，求染色教程，感谢

youyang

求各位大神指点一下间充质干细胞分化成骨，成脂，成软骨染色方法和注意事项，谢谢

weijunning

成脂肪染色主要使用油红O，此试剂有现成的染色SOP；操作时不要垂直细胞进行漂洗，请以大约30°的角度进行染色的漂洗，以防止脂滴破裂，影响染色结果。成骨染色主要使用茜素红，具体染色SOP都比较成熟，网上可以搜到，成骨染色没有什么特别的注意事项。

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染料配置：油红O 0.5g溶于100 mL异丙醇2 X5 C# d, k4 k
% o' i  Z9 k3 N  K# ]1 g7 O
染色步骤：$ v$ Q$ X& V; d$ I9 y; ~) C5 M
        1. 稀释：染料同蒸馏水按3：2稀释% o  }7 a5 i; Q. K
        2. 过滤：通过定性滤纸过滤9 Y+ d% W' Q& w  l# M
        3. 固定：吸弃培养液后加入固定液5 min
  D; C- k' o% b5 d        4. 洗弃固定液，加入染色液15 min后水洗一次镜检观察
+ Y7 c( Q9 k, H! U; |        5. 苏木素复染1-1.5 min$ r" A/ ~9 a3 K. t  d) |
        6. 水冲洗至变蓝，观察。
: {" t2 o* K% h注意：1. 配置好的油红O工作液要在2个小时内用，不能放置时间过长；
) A9 I6 {% |1 ^5 d6 `& a0 f             2. 苏木素复染时间不能太长；
+ }: X1 |( B* j6 u% B8 K9 `              3. 染色结果不能长期保存，应尽快观察及照相。
: f  o8 E2 [5 `1 u$ F+ v

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茜素红染色：1 g Tris 100 mL ddH2O 调pH4.3，加0.1 g的茜素红。
' r0 ^  f1 m1 {! k% Q( v1． 吸去诱导液，加入PBS洗一到两次；
( p1 m  ]- E  U0 n, {& T2． 加入10%中性甲醛，固定30 min-60 min；& |# f+ ^* ?/ }& o+ ]* r2 B0 i
3． 吸去固定液，加入0.1%的茜素红染色液，染色6-10 min；$ {0 ?* }- P! B  t7 x( p
4． 用PBS洗两次，去除残留的染色液；/ J( [( [/ i9 i" K
5． 加入PBS，完成染色
2 s$ B' l1 X1 d1 ^5 j 
- x, n2 H! d4 V" G * O7 p1 I- n% M9 y
 6 W6 `0 b+ F- ]) K
6 s4 H7 t3 B6 I% ?" k' A; z

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祝你好运！

youyang

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; u  s- y$ c6 V. A
2 z) v) [4 n9 T& v- b/ ]/ q; W谢谢亲

youyang

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! p1 ^' J# v- A0 b3 `2 J/ z; _谢谢亲们不吝赐教