想做间充质干细胞分化成骨成脂成软骨实验，求染色教程，感谢

youyang

求各位大神指点一下间充质干细胞分化成骨，成脂，成软骨染色方法和注意事项，谢谢

weijunning

成脂肪染色主要使用油红O，此试剂有现成的染色SOP；操作时不要垂直细胞进行漂洗，请以大约30°的角度进行染色的漂洗，以防止脂滴破裂，影响染色结果。成骨染色主要使用茜素红，具体染色SOP都比较成熟，网上可以搜到，成骨染色没有什么特别的注意事项。

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染料配置：油红O 0.5g溶于100 mL异丙醇' S2 v9 N/ x: U- l, v3 N- G
( h! S0 h  ?1 [. F" G( Y
染色步骤：& t* v  F8 h$ w9 m7 [0 e
        1. 稀释：染料同蒸馏水按3：2稀释6 x6 s* ~# D4 Z
        2. 过滤：通过定性滤纸过滤6 `8 _7 C2 J* y  C
        3. 固定：吸弃培养液后加入固定液5 min
) O) d3 a' Y& k% H; @9 Y% Z2 b        4. 洗弃固定液，加入染色液15 min后水洗一次镜检观察
! U& y$ k9 k5 u; }4 l        5. 苏木素复染1-1.5 min
. a7 q, B  h7 x4 Q, ^9 y6 {        6. 水冲洗至变蓝，观察。
7 d$ I9 W' x( q9 ?注意：1. 配置好的油红O工作液要在2个小时内用，不能放置时间过长；
+ S; v) h9 E8 `7 s             2. 苏木素复染时间不能太长；
$ o/ ?1 w1 |/ b* U$ e( ]              3. 染色结果不能长期保存，应尽快观察及照相。
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茜素红染色：1 g Tris 100 mL ddH2O 调pH4.3，加0.1 g的茜素红。7 \7 y) _9 F1 q  j0 z  {& w
1． 吸去诱导液，加入PBS洗一到两次；0 A4 q1 g; w3 N; }- x# l+ ?! w( Q/ f: @
2． 加入10%中性甲醛，固定30 min-60 min；% Q( O1 P: |2 j" _$ y' p' ~6 l
3． 吸去固定液，加入0.1%的茜素红染色液，染色6-10 min；! I/ R/ k9 I. R8 }) C( z
4． 用PBS洗两次，去除残留的染色液；8 W7 {& \! M! ^! L# Y, h$ p+ I  R
5． 加入PBS，完成染色
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" @0 X4 U/ S2 U: W# w- V; b8 X 1 @3 k. m0 c3 E/ A' C  v
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祝你好运！

youyang

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( x# P) j% S% Q% f谢谢亲

youyang

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4 ]6 I. B  A& x1 A. f- D谢谢亲们不吝赐教