CIK贴壁并变成了长梭形

鸵鸵

回复 刘艳85 的帖子4 b2 z# {- [( c) G/ z' i0 U

$ k$ `% ^+ b9 ]7 R" D0 A! N如何排除患者血液不好这种情况呢？平常也会遇到特殊情况

cheeray

估计单核细胞比例大。

teahouse0802

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) Q# t/ n; D- R, v; H' E! s( ?2 a. a- E; u
赞一个，尤其是后面说的操作要漂亮，做实验就像是做一件艺术品。我刚开始做细胞的时候就觉得带我的组长，手在操作台里就跟能跳舞似的，做出来的东西也特别的清晰漂亮。

暖羊羊

有没有可能向Ficol淋巴细胞分离液中加液的时候加的太快了，而冲破了界限呢？我感觉这步是个细致活。如果离心机没问题的话，还有一个可能就是病人的个体差异，血液状况不佳。
3 l8 s0 \" _% _1 C: f% r另外单核细胞（DC细胞、巨噬细胞的前体细胞）在CIK的培养体系中生长不占优势，及时带进去一部分杂质应该也不会这么大的比例。

momoenn

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9 f* S/ X8 ^2 Z: i1 s4 q
* {. C: E- \5 f/ f4 j+ n( l, y; V我是来膜拜的

bukuro

PBMC培养第二天细胞基本都贴壁了，这很正常嘛。您为什么会有疑问呢# g! d) Q- }/ E) o- c* c* s2 u
PBMC里的细胞，包括T细胞都是微微贴壁的。平常说T细胞不贴壁，那也不能说是错的。不过，只要您不作弄她，显微镜下看，她还是微贴的，有时她还怕孤单，会抱团。
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第三天发现贴壁的T细胞多数已变成长梭形，您这种说法是错误的。让我怎么说您好呢。不管多厉害的T细胞也不会变成长梭形。除非您产生了误会？
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让我猜猜您为什么会产生误会。, c* v5 I8 U0 z( k4 t, }( e
我想您怕是误会了PBMC等于Lymphocyte吧？
! F9 s4 G  e0 @其实PBMC是个多元化的东西。复习一下下面这个流式图吧。路人甲的PBMC，您要培养的目的细胞是淋巴细胞吧。她在PBMC里含量很少，少到就那么一小撮。不光路人甲这样，每个人都这样。平常作体检的时候，问问医生就知道啦。
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1 ]( X- A- B- `5 m+ s$ J8 y& y
刚提取的PBMC,因为您反复的清洗操作，不管是贴壁的单核细胞，还是不贴壁的淋巴细胞，都不会马上贴壁，看起来圆圆的，模样都一样。您是不是以为这些都是淋巴球？那可不是阿。
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( @: J5 j+ T+ T3 Q% C2 G# D看您培养液里加的东西，短时间内不会让淋巴球之外的细胞死亡，长期培养后，大部分就只剩下淋巴细胞了。1 \- d( f* @1 w9 A# Q8 N. f) z9 k

! f) t$ I. Z5 X. e你再多养两天就看出不一样了。单核球和颗粒球会慢慢消失，如果不消失，那就换换培养液吧。
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另外，我看您提PBMC的图，平常真这么操作吗，是不是太能作了，就不能干净点吗？
% G/ G8 Y& |& x. t如果不把实验当成一种艺术，那最少也要求其漂亮。拜托了。
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teahouse0802

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( q: @  K' N$ v1 t5 ]/ p
. A1 G( k& _; m( T7 d3 y如果参数设置的是转速，由于力矩不同有可能出现离心效果不一样。但你说的参数是离心力800g 10min，离心效果不同是什么原因呢？

mkhorse

说不定，会有意想不到的结果呢

mkhorse

分离之后，有没有用血细胞分析仪计数呢？估计是淋巴细胞所占比例偏低，而单核细胞所占比例比较大的原因吧。所以镜下看的话巨噬细胞和树突细胞的前体细胞比较多。没关系，再养几天看看，应该是没问题的

小刘

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0 c; j1 s( C$ A$ y& Q5 l- `8 g
/ F4 a, s0 S/ Y6 u# S# t+ G  ?我说的是离心机，就像久保田和thermo 厂家一样 同样是800g 10min 但是离心的效果就不一样，我有这经历，不是做的时间长短，而是工作中有没有细致程度，呵呵