干细胞的复苏与冻存如何操作？

kate8801

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) X; @0 y6 b$ N: E（1）准备 37°C 水浴和预热到 37°C的完全培养液；准备好一个15mL离心管，同时加入9mL的完全培养液；
5 I0 \- s) p5 U（2）准备好这些后，将细胞从液氮中取出，放入到水浴锅中，同时轻轻摇动，保证细胞能够在2min内完全溶解，同时应该注意不要把冻存管的管口没入水浴中（可能由水引起污染）；
) z% I5 h0 N9 o, z（3）溶解完全的细胞要快速转移到无菌超净台中，用75％酒精棉球擦外表面。用吸管将冻存管中细胞悬液吸到15mL的含有培养液的离心管中，同时用培养液洗2次冻存管，一起加到离心管中吹匀，避免产生泡沫；
! L: X  q1 s/ H  ~2 V$ e+ Q（4）250 g 离心 5 min；弃上清液，加入2-3mL预热的完全培养液，轻轻吹匀，保证细胞完全重悬；
9 N# H  D& H; z; n% A（5）将重悬的细胞接种到T25或者是T75的培养瓶中，加入适量的培养液，再把细胞摇均匀，放入37°C 、5% CO2 培养箱中；4 @* H2 g( J  @1 `* [
（6）第二天进行换液，保证去除死细胞。正常的培养过程是三天进行一次换液，如果细胞长到有80-90％汇合进行传代。3 n# }: ?$ E5 w
细胞冻存：将冻存管放入冻存盒里，再放入-80℃过夜，由于聚氯乙烯导热比较慢，所以温度可慢慢降下来，次日可直接放入液氮罐。
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