脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程 刚开始做希望大家多多帮忙

张荣华

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我们培养的细胞第7天有很多细胞长出角，是别的细胞呢还是啥原因造成

张荣华

回复 鸵鸵 的帖子0 i+ J- j0 \" ^1 q( W* D: Q% n

1 X8 o% H+ a( ~+ ^好的，谢谢你！还想请教一下你们吸取白膜层大概能吸取多少毫升？

鸵鸵

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! {3 ]4 W% _4 p4 B; P+ k我们用的是1640，接种密度和楼上一样，没有出现过细胞破裂的情况，而且细胞在5-9天是增殖高峰期，建议楼主换一种培养基做下对比实验看看

张荣华

回复 hengton 的帖子: S: _# e- {1 }* n7 [8 s5 @6 `: Z
6 P/ M4 r" J* Y+ o( x1 f1 A
我用的是GT-551培养基  

hengton

张荣华 发表于 2015-8-25 15:15
/ D+ N4 e; [! c; T回复 hengton 的帖子
& \/ I" [, b7 F- f) W# Q
! k# ?9 m0 |1 e  Y% t  |请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现 ...

0 z! \) v/ a& p3 m( c1、密度一般是保存在1.0-2.0*10^6个/ml左右。这样细胞生长比较好。
8 e) ~2 L9 w% a  Y" `1 v2、你用的是什么培养基，会不会是NaCl浓度导致的细胞胀破？

张荣华

回复 cheeray 的帖子
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不知道是不是差不多，那你们外周血的过程是怎样的？能否让我参考一下

张荣华

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$ x/ ~( U9 S6 z' m
) D" ?. A( ^# ], }请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现溶解的状态，细胞膜开始模糊，这是什么原因呢

cheeray

脐带血 应该跟采集外周血培养差不多吧。。

zgzy

建议在培养第8天左右及回输病人前做细胞质量检测及活性检测，以确保安全性和细胞活力

hengton

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  [0 @% X# o% N6 ]

" B( i3 \4 B$ b1 T- V" n' r1. 将分离机采集细胞缓慢加在细胞分离液上，体积比为1:1，800g，室温离心20分钟；
. O' X- ~9 h, D2. 收集界面的白色絮状细胞加入30ml的低糖DMEM培养基，轻轻吹打混匀，300g，室温离心10分钟；
# |" k: N( S8 n' c; O/ C$ t; g3 K3. 重复离心洗涤共3遍；% m) o3 w! q! A4 M0 q
4. 收取细胞轻轻吹打混匀，加入无血清培养基及IFN-γ 置37℃、5% CO2 孵箱中培养；
5 @9 I" v7 M3 @5 G5. 24 h后加入IL-2 ，CD3 ，IL-1  继续培养，；% t* T- H' f/ }
6. 每天观察细胞生长状态并根据情况进行换液及加入IL-2 进行扩增；" H+ ?- V6 `! L0 X
7. 细胞收集：第14-20天收集细胞，离心弃上清液，用生理盐水洗涤细胞2 次以上，重新混匀，悬于100～200 ml 输注用生理盐水中。
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