有做过小鼠胚胎干细胞电转的战友吗？

LuXK

打算用伯乐电转仪电转cas9质粒到mESCs中，请问有做过的战友吗？细胞数，质粒的量和电转参数是怎么样的？非常感谢！

缥飘实验员

回复 iseeyou1210 的帖子0 W* h9 P& I% ~. ^& A% N5 A8 A1 L

. P5 `) X# T% H请问电转前需要高密度传代么，比如，100mm 皿，平时是1*10^6 传代，电转前一天按 5*10^6 传代，第二天消化了电转，电转的一些具体参数还请指教下。

细胞海洋

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5 G- m& d/ f" o建议你发新帖提问

蒋春英

请问电转条件敲除的质粒入小鼠胚胎干细胞，230V, 500uF，电转时间有15ms，这样是不是一次失败的电转呢？电转时间偏长可能的原因是什么呢？谢谢啦

iseeyou1210

细胞数一般是10million，质粒5ug足以，我用过2，5ug的，也有很多positive clone! Y- e$ e6 |7 t4 j6 |/ O4 N

LuXK

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2 d2 l+ ~9 D. n8 {* U0 k4 v# m7 Q
谢谢，细胞数和质粒的量分别是多少呢？

iseeyou1210

240-260V, 500uF 电转
7 k9 G% j$ I$ t4 q: n5 o) V8 T/ ~" e- j或者是直接用lipofectamine 2000都可以。