有做过小鼠胚胎干细胞电转的战友吗？

LuXK

打算用伯乐电转仪电转cas9质粒到mESCs中，请问有做过的战友吗？细胞数，质粒的量和电转参数是怎么样的？非常感谢！

iseeyou1210

240-260V, 500uF 电转
- n  H! i' g% G7 Z" A( ~或者是直接用lipofectamine 2000都可以。

LuXK

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# z/ u# d3 ^6 F, I9 D) N0 L; a# @' h3 n% k
谢谢，细胞数和质粒的量分别是多少呢？

iseeyou1210

细胞数一般是10million，质粒5ug足以，我用过2，5ug的，也有很多positive clone- C' U- q, ~$ [) e  b$ F

蒋春英

请问电转条件敲除的质粒入小鼠胚胎干细胞，230V, 500uF，电转时间有15ms，这样是不是一次失败的电转呢？电转时间偏长可能的原因是什么呢？谢谢啦

细胞海洋

回复 蒋春英 的帖子# ]' A$ J% L) s% r' Y3 D

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缥飘实验员

回复 iseeyou1210 的帖子# Y6 G- u2 y4 k( y
3 Q! P0 X9 s0 d3 Q, z+ s9 y
请问电转前需要高密度传代么，比如，100mm 皿，平时是1*10^6 传代，电转前一天按 5*10^6 传代，第二天消化了电转，电转的一些具体参数还请指教下。