小黑点污染

lieorebecca

我们实验室所有的培养瓶里都有这种小黑点，在200倍显微镜下可见其在小范围内移动，排除了支原体感染，如下图箭头所指，请指点解决办法。另外图中黄色的折光性强的东西是什么呢？

mecol

是活的吗？是否考虑血清里面的寄生虫？黄色折光性强的是死细胞？皆可考虑。

lieorebecca

小黑点会动，寄生虫不是应该过滤掉了吗？

gxbzjznn

会不会是死的细胞碎片夹在着血清里面的杂质，中等程度粘附在细胞培养皿底部，在细胞拍照时由于晃动造成的视觉上的错觉！

saifast00

细胞碎片，小黑点小范围移动？是布朗运动？你看看它转不转圈，如果只是左右摇摆那就不是细菌

wuhuaguo88l

可能是黑胶虫，也可能是细胞碎片，做布朗运动而已。

鸵鸵

感觉很大可能是黑胶虫，我们之前也有观察过，后来换了不同批次的血清，就没有了

cleargreat

很像是血清中的杂质，你的血清是不是自己灭活过。

caustic

一旦在细胞培养的过程中发现有黑点生成，首先，要肉眼观察培养基是否混浊，然后，在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动。如果细胞被污染，
' g8 k  N. Y' c- n微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。如果培养基未变黄，只是生长状况不好，可能是黑胶虫污染，避免黑胶虫的污染，首先要确定血清是否新鲜，还有血清不是反复冻融。
! k, K, n# H9 c如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，没有任何变化，那么，黑点的出现可能与以下几种情况有关：
  i% U: K& }. ], }! G  （1）细胞生长过老，破碎的细胞残骸；/ e+ o) k4 c2 ?8 ^( U
（2）血清质量不好，反复冻融的结果；+ z$ Q& W  p. s' N1 w" V
（3）配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长；
! G$ W. o0 {5 ` （4）配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点；
3 }! G$ O3 o4 X# L4 N. M. s （5）培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。
" k; r; X3 R) i0 q4 f; M ! g8 P! ^$ I; ]9 Y4 N

lieorebecca

谢谢大家，换了家血清也是有小黑点，是分装的 没有反复冻融，小黑点的运动等会我去确认下。