UC-MSC培养基的问题

playboy723

原先培养基是DMEM/F12+15%FBS，细胞长的很好。后来把FBS换成5% 人白蛋白+20ng/ml EGF培养30小时后细胞状态明显不好了，表面出现很多小黑点渣滓，请问这种情况正常吗?   我继续换成FBS后细胞状态仍然不好，仍有很多渣滓，感觉细胞增殖能力也很弱了，传代后细胞长的很慢，大家有过类似的经验吗？望不吝赐教，谢谢。   对了人白蛋白我用的是临床上常用的20%白蛋白

奋斗的时光

白蛋白虽然是血清里的主要成分之一，但不代表血清啊。我养的是生殖干细胞，也会出现这种情况，为了避免血清中不清楚的成分对细胞的命运产生影响，所以把血清换成白蛋白，结果细胞状态很快变差了。
& J) V5 S- R. C) E( y) ]9 N1 V$ H虽然不是同一类细胞，但个人认为血清对于细胞来说还是很重要的，如果有其他实验目的的话，不到万不得已就不轻易替换血清。& D' H% j, }4 ?. V" [
希望对你有帮助。

sdudai

我想知道这里面的小黑点渣渣是什么成分，是啥东西？

ganggangtry100

细胞的确衰老了，而且你的细胞融合度太高了. c6 O2 J# ^, R. H2 [( f
经典的MSC培养是 ：基础培养基（如DMEM/ IMDM 等）+10%FBS   o% M3 X1 u1 \, }9 p
你加5% 人白蛋白是为了去除血浆后，解决细胞贴壁吧？？
8 A# W' e: {% G. c如果你后面的实验必须去除血清防止其干扰的话，建议你包被瓶子吧，把5% 人白蛋白去掉，浓度高，细胞容易衰老和分化。$ x* [, z8 S9 W2 K7 W
如果后面实验是想降低的血清，可以用2% 的FBS +EGF+bFGF 等因子 会好一些。
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121qwq

用特定的培养基可以解决，有小黑点意味着衰老了

playboy723

回复 ganggangtry100 的帖子6 d, n) r( ?) K/ I0 u+ k. c
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不是解决细胞贴壁的问题，细胞用FBS养一直是贴壁的。是老板让这么养的，结果换成白蛋白后我的细胞也不能要了，浪费我的心血。他应该是想要发明一种新的培养基吧，我想不明白的是：白蛋白也是人体的主要蛋白，即使他对细胞生长起不了多大的作用，但他怎么会造成细胞老化呢？况且我还加EGF了。好奇怪，MSC在没有血清的情况下会老化吗？   如果MSC没有血清的维持会立即老化的话那就是MSC的生长严重依赖血清，如果MSC没有血清维持短时间内也不会老化的话那就是白蛋白的问题了，难道是白蛋白的质量有问题？还是白蛋白里面添加的东西对细胞有伤害？大家帮我分析一下，谢谢了！

playboy723

回复 sdudai 的帖子! k* G, _" U3 p
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我也不知道，在镜下看，他们紧贴在细胞表面，基本每个细胞上都有，挺多的，细胞核周围好像更多些，是一种固体颗粒物，我猜想是细胞排出的代谢废物？大家说说

chuanbaozang

我自己有过数次实验& W  m) ]4 R3 X  n4 B! y
单纯的使用成品白蛋白对培养的MSC效果很差，即使有各种因子的存在
/ f; |! X) H- ]: ]# @: G+ Q8 b不只是人血清白蛋白，自己分离的脐血浆细胞培养效果也不理想

menghy

从形态上看是细胞衰老了，这个细胞已经很难往下传代了，血清里含有各种因子，对细胞贴壁和生长都有重要的作用。你开始培养的使用的FBS的浓度也很高，可以换成5-10%即可。细胞浓度太高容易促进细胞分化。

ywx6302706008

细胞已经老化了都，把血清撤除之后，只用白蛋白是远远不够的，血清当中除了白蛋白，还有很多其他成分，比如脂类，维生素，转铁蛋白，胰岛素，细胞因子，等等，就算是开发一种新的培养基，这些其他成分应该要考虑进去的。