有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

ych123

有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，非常感谢，，，

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学习一下，互相交流。

做梦的孩子

1. 收集细胞，生理盐水洗2次。PBS悬浮细胞，细胞浓度控制在1~9*10^6。5 ]% E- V, l( f- _% d% a
2. 将抗体加入流式检测管中。
! b# `8 B( }: L7 h! }3. 每管加入100ul 细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。* _% V% Q7 U; o/ G& Y' [+ c
4. 加入PBS缓冲液1ml清洗2次，300g离心5min。
8 i7 r% l7 {- r8 [1 b5. 弃上清，加入500ml PBS重悬，然后上机。; j8 x  j6 P4 s, k6 [3 A
6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

ych123

回复 yingfeixiang 的帖子
& M: I$ Q" h) U0 u6 T# h
. r  e& s! k$ h+ e8 z9 @恩，应该做5管的，震荡过的

yingfeixiang

回复 ych123 的帖子& ?6 {: J+ Y$ k% N3 B: \, x8 T2 V
5 I0 J9 ~6 z/ ^9 s# [( x
你做五管，细胞肯定够了，一个是在离心清洗时细胞丢失太多了，第二个就是最后重悬时没有做好，还在流式管底呢，可以振荡器振荡一小下

ych123

回复 zxd962735279 的帖子
6 ~0 d9 q$ G4 \
, @& r/ \) }8 f; A+ i# b' N重悬不充分，有可能哦，下次我注意点

zxd962735279

回复 ych123 的帖子. F* e/ ^8 r, d0 B: r/ J, W
% b! i+ r$ n% @! M4 ^
我之前也出现这情况，因为细胞在最后一次洗细胞后重悬不充分导致的，不知道你是不是，

ych123

回复 yingfeixiang 的帖子
" _8 s$ u7 \: X3 S- L1 k, o3 S4 q* K  {' z9 s" ]$ K# |: e
我是一个T25的瓶分为6管，一个对照，5个标记，后面上机老师说细胞数太少了，跑了一下就没跑了

ych123

回复 daviddow 的帖子  L3 A3 K2 l& B/ E3 l
, O' D- J- ~! B; Q+ V
你有养过这个细胞的经历吗，求指导啊，我按照文献上面的来经常养出来都不纯，杂细胞很多

yingfeixiang

回复 ych123 的帖子5 l4 M. b5 a' M: |

5 ^/ v8 l( E* ^: V6 u: i细胞数肯定够做的了