有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

ych123

有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，非常感谢，，，

杏色玻璃

收集您的细胞，pbs洗后离心弃掉PBS，加所检测的抗体，4℃孵育半小时，拿出来后加差不多3mlpbs后在离心，弃上清加大约200ul左右pbs轻弹混匀就可上机了

yingfeixiang

1. 消化收集所需细胞数，离心洗涤弃掉培养基，PBS悬浮细胞。
/ l* G2 b3 _# n" e% N% V2 h2. 准备流式上样管，分别加入相应抗体：
& M0 I" Y/ z7 N1 s3. 每管加入细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。5 n% q+ N! y# R+ _' O+ }
4. 加入PBS缓冲液2ml混匀，1500rpm离心10min洗涤细胞。8 q0 s+ b) P/ U# M& U4 r. _* k
5. 弃上清，加入1%多聚甲醛悬浮细胞。( ]3 J/ g, n# j; C% n9 [) v- L
6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

ych123

回复 杏色玻璃 的帖子! J2 q  M5 j" P5 v( T9 ]$ |" l
' ^) Y. N) m9 K' ^$ c
好的，谢谢你

ych123

回复 yingfeixiang 的帖子
" I+ M, R* M, u% R+ e* q& N* w, f5 I6 u; R" W, D
非常感谢，今天做了一次，一个t25瓶子分装6管，在上机的时候就因为细胞数太少而失败了，伤心啊

sajiemeian

是好少啊，T75的分10个也太少

daviddow

细胞数量太少了，一般应该10^6细胞

ych123

回复 sajiemeian 的帖子4 a# ]- S* `" d! o+ ]  r' \

- q. X4 g( l/ Y$ E. K: ^T75的不是可以收获2*10^7细胞吗，怎么会少呢

ych123

回复 daviddow 的帖子2 U- \/ b/ V& E, ]& W
. x$ C3 M$ m# t+ [: l% }; M' I
是的，但是我看T25的瓶可以收获5*10^6细胞的以为够了，后面白白浪费一瓶细胞，主要脐血间充质干细胞培养起来确实不易啊

daviddow

回复 ych123 的帖子2 A! s  h) R2 Y# ]; e, ?# u3 q

7 z' V2 g% k! l' d! i; A" b这个细胞培养起来应该很容易，而且生长速度很快。就是可能传代不能太多