有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

ych123

有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，非常感谢，，，

杏色玻璃

收集您的细胞，pbs洗后离心弃掉PBS，加所检测的抗体，4℃孵育半小时，拿出来后加差不多3mlpbs后在离心，弃上清加大约200ul左右pbs轻弹混匀就可上机了

yingfeixiang

1. 消化收集所需细胞数，离心洗涤弃掉培养基，PBS悬浮细胞。
+ U0 v; e0 ^# G4 D  P2. 准备流式上样管，分别加入相应抗体：
' {* M& c+ _& [  |$ R7 R# V3. 每管加入细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。! h( V0 b9 g! U& F6 K
4. 加入PBS缓冲液2ml混匀，1500rpm离心10min洗涤细胞。- e" T9 ]% R5 f1 j0 s# o# A
5. 弃上清，加入1%多聚甲醛悬浮细胞。
# P$ R, j* N( U6 k6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

ych123

回复 杏色玻璃 的帖子& \9 S0 e5 F, D! \

" d% w6 E' U9 Y) a: t- {/ T好的，谢谢你

ych123

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/ T4 O( F. ]4 b4 \2 E) z) \& _  V; |: X. F, a% x
非常感谢，今天做了一次，一个t25瓶子分装6管，在上机的时候就因为细胞数太少而失败了，伤心啊

sajiemeian

是好少啊，T75的分10个也太少

daviddow

细胞数量太少了，一般应该10^6细胞

ych123

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- ?$ B. V2 {3 ~& Q& v' d2 x5 N+ }. U  }2 Z
T75的不是可以收获2*10^7细胞吗，怎么会少呢

ych123

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) \5 \6 n7 W9 a3 _
# U2 @. Q9 e- m* Y+ @. A3 n* {是的，但是我看T25的瓶可以收获5*10^6细胞的以为够了，后面白白浪费一瓶细胞，主要脐血间充质干细胞培养起来确实不易啊

daviddow

回复 ych123 的帖子( [$ U8 g( y- d7 ?# b: Z

6 Q% X( p: Z6 T: }1 C! N这个细胞培养起来应该很容易，而且生长速度很快。就是可能传代不能太多