有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

ych123

有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，非常感谢，，，

杏色玻璃

收集您的细胞，pbs洗后离心弃掉PBS，加所检测的抗体，4℃孵育半小时，拿出来后加差不多3mlpbs后在离心，弃上清加大约200ul左右pbs轻弹混匀就可上机了

yingfeixiang

1. 消化收集所需细胞数，离心洗涤弃掉培养基，PBS悬浮细胞。% r0 K7 v/ h- x& c) H2 W( V! e
2. 准备流式上样管，分别加入相应抗体：
6 I" }/ k8 _( X2 m2 o7 o3. 每管加入细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。+ k9 K( T4 L8 b9 |2 W0 P4 q: d
4. 加入PBS缓冲液2ml混匀，1500rpm离心10min洗涤细胞。; `$ v- X0 d, z7 ^
5. 弃上清，加入1%多聚甲醛悬浮细胞。
- B* w* F$ {2 l8 M& i- d4 _6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

ych123

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; M* S$ Z& {* d2 X% h6 m# T3 r3 A- Y! N8 B
好的，谢谢你

ych123

回复 yingfeixiang 的帖子& o& w5 l% M  X5 S
: M( Z) Y1 r% {$ e$ o
非常感谢，今天做了一次，一个t25瓶子分装6管，在上机的时候就因为细胞数太少而失败了，伤心啊

sajiemeian

是好少啊，T75的分10个也太少

daviddow

细胞数量太少了，一般应该10^6细胞

ych123

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* D! ]" M2 V! s- q9 a( C/ k, C) l& j6 d4 P. m8 d0 ?0 M2 k- O
T75的不是可以收获2*10^7细胞吗，怎么会少呢

ych123

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' ]% O, K0 d. N1 o) z
2 C, _6 H3 `# }: h6 _! e. _是的，但是我看T25的瓶可以收获5*10^6细胞的以为够了，后面白白浪费一瓶细胞，主要脐血间充质干细胞培养起来确实不易啊

daviddow

回复 ych123 的帖子& @9 N4 a# Y* W5 t

: q' f2 R) Y2 ^7 Y9 z3 A( E这个细胞培养起来应该很容易，而且生长速度很快。就是可能传代不能太多