有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

ych123

有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，非常感谢，，，

杏色玻璃

收集您的细胞，pbs洗后离心弃掉PBS，加所检测的抗体，4℃孵育半小时，拿出来后加差不多3mlpbs后在离心，弃上清加大约200ul左右pbs轻弹混匀就可上机了

yingfeixiang

1. 消化收集所需细胞数，离心洗涤弃掉培养基，PBS悬浮细胞。
7 r- N3 d  v& U- Z" e" B2. 准备流式上样管，分别加入相应抗体：
$ [% U( \+ G& L9 l$ B- F- k8 a, o# ]3. 每管加入细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。  G0 ~( [+ q5 d2 D: o
4. 加入PBS缓冲液2ml混匀，1500rpm离心10min洗涤细胞。
* e2 w1 f$ a1 d& o4 F! q" |5. 弃上清，加入1%多聚甲醛悬浮细胞。
$ e8 F; }5 V7 B6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

ych123

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( ]7 v! `" g% x4 _# ~7 i- w7 r! j好的，谢谢你

ych123

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: M% F( S* y4 t% g# b
. t" q$ S8 \- {. c0 ~) C( [非常感谢，今天做了一次，一个t25瓶子分装6管，在上机的时候就因为细胞数太少而失败了，伤心啊

sajiemeian

是好少啊，T75的分10个也太少

daviddow

细胞数量太少了，一般应该10^6细胞

ych123

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# c; m+ b2 j9 ?
" M5 E3 H* \  c8 O. W! KT75的不是可以收获2*10^7细胞吗，怎么会少呢

ych123

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/ z0 b5 K/ f6 ]/ ^$ ]8 m3 |
- {2 Y* \9 ^1 H1 M& Y& `0 `是的，但是我看T25的瓶可以收获5*10^6细胞的以为够了，后面白白浪费一瓶细胞，主要脐血间充质干细胞培养起来确实不易啊

daviddow

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' ^0 A! E+ R, E3 E' `5 N4 U3 T7 {, a! |' v& Y6 y: \' l# y2 I# T: T
这个细胞培养起来应该很容易，而且生长速度很快。就是可能传代不能太多