有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

ych123

有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，非常感谢，，，

杏色玻璃

收集您的细胞，pbs洗后离心弃掉PBS，加所检测的抗体，4℃孵育半小时，拿出来后加差不多3mlpbs后在离心，弃上清加大约200ul左右pbs轻弹混匀就可上机了

yingfeixiang

1. 消化收集所需细胞数，离心洗涤弃掉培养基，PBS悬浮细胞。
) \& n7 l  B, f# ]6 l2. 准备流式上样管，分别加入相应抗体：' g7 Y8 {  K3 U& T/ K, z$ n
3. 每管加入细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。  O3 q+ n4 M- D$ |0 z  _# U. d2 T) _
4. 加入PBS缓冲液2ml混匀，1500rpm离心10min洗涤细胞。
7 y, }( U- J3 E5 V1 M5 Q5 y5. 弃上清，加入1%多聚甲醛悬浮细胞。
' I5 P# k# T2 D' V% h: r  C, Y6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

ych123

回复 杏色玻璃 的帖子6 z" h+ U+ {1 h4 I# i+ a& Z
& W4 l7 a3 u4 p9 K. R8 A
好的，谢谢你

ych123

回复 yingfeixiang 的帖子4 s3 {2 o3 G0 t( ?; N

5 a$ X6 V! ]. p5 \0 B, |非常感谢，今天做了一次，一个t25瓶子分装6管，在上机的时候就因为细胞数太少而失败了，伤心啊

sajiemeian

是好少啊，T75的分10个也太少

daviddow

细胞数量太少了，一般应该10^6细胞

ych123

回复 sajiemeian 的帖子1 u( U+ w! u: I( S  ?3 [

$ T: j6 _, h8 I1 k* X2 a$ [0 RT75的不是可以收获2*10^7细胞吗，怎么会少呢

ych123

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; I$ w( G7 h( a+ I2 W1 ^2 u1 K
" ^& U0 u+ H0 Z+ A是的，但是我看T25的瓶可以收获5*10^6细胞的以为够了，后面白白浪费一瓶细胞，主要脐血间充质干细胞培养起来确实不易啊

daviddow

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% {% e; d$ ~0 Y0 g! w4 V, ?% S/ K1 K
这个细胞培养起来应该很容易，而且生长速度很快。就是可能传代不能太多