有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

ych123

有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，非常感谢，，，

杏色玻璃

收集您的细胞，pbs洗后离心弃掉PBS，加所检测的抗体，4℃孵育半小时，拿出来后加差不多3mlpbs后在离心，弃上清加大约200ul左右pbs轻弹混匀就可上机了

yingfeixiang

1. 消化收集所需细胞数，离心洗涤弃掉培养基，PBS悬浮细胞。( Z+ I- \; @5 K/ B7 T
2. 准备流式上样管，分别加入相应抗体：1 w+ W( q) [7 H2 E8 A
3. 每管加入细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。
' i0 u2 b6 N1 H% c  P, W; z. t/ \: Q+ Y4. 加入PBS缓冲液2ml混匀，1500rpm离心10min洗涤细胞。+ {6 h7 O$ {2 V$ e
5. 弃上清，加入1%多聚甲醛悬浮细胞。
: @1 `4 Q1 o4 K9 f3 l+ M6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

ych123

回复 杏色玻璃 的帖子, u" s- @/ x$ d2 U) h

# z+ Y1 }! G7 P1 H) U+ o好的，谢谢你

ych123

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6 D$ l" ^. c) S/ S
6 u2 k, ]- a& X- r! f5 X5 J+ {非常感谢，今天做了一次，一个t25瓶子分装6管，在上机的时候就因为细胞数太少而失败了，伤心啊

sajiemeian

是好少啊，T75的分10个也太少

daviddow

细胞数量太少了，一般应该10^6细胞

ych123

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9 G, o7 Q- c3 D* \( ~3 q! O8 d' M! N
T75的不是可以收获2*10^7细胞吗，怎么会少呢

ych123

回复 daviddow 的帖子/ C' Y9 T2 Q! ~9 j$ R/ V4 D' z- `

3 `2 G3 C/ e* _" b0 O; S是的，但是我看T25的瓶可以收获5*10^6细胞的以为够了，后面白白浪费一瓶细胞，主要脐血间充质干细胞培养起来确实不易啊

daviddow

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# T7 X4 \  A# z# G, i, a) f' `& d1 f# n- \8 B: f
这个细胞培养起来应该很容易，而且生长速度很快。就是可能传代不能太多