有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

yingfeixiang

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  X, r1 \7 O( [一般的5*10^5细胞就可以做出很好看的流式图，不知道你的方案是怎么设计的。

yingfeixiang

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细胞数肯定够做的了

ych123

回复 daviddow 的帖子
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/ T, u7 u7 d/ C( ]  a你有养过这个细胞的经历吗，求指导啊，我按照文献上面的来经常养出来都不纯，杂细胞很多

ych123

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$ I5 D) q8 p' ~3 }# v
( I# G. \. ?. d$ f' }我是一个T25的瓶分为6管，一个对照，5个标记，后面上机老师说细胞数太少了，跑了一下就没跑了

zxd962735279

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: o1 ?2 M# U) v! a/ K8 ?2 a: M我之前也出现这情况，因为细胞在最后一次洗细胞后重悬不充分导致的，不知道你是不是，

ych123

回复 zxd962735279 的帖子
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重悬不充分，有可能哦，下次我注意点

yingfeixiang

回复 ych123 的帖子; D# B* N! I; I1 m4 \

" b" g" F( B4 \+ J- f你做五管，细胞肯定够了，一个是在离心清洗时细胞丢失太多了，第二个就是最后重悬时没有做好，还在流式管底呢，可以振荡器振荡一小下

ych123

回复 yingfeixiang 的帖子3 z1 Z4 ^+ f6 _1 G5 a% O/ k

9 Z! ~3 q! C, }5 y; {恩，应该做5管的，震荡过的

做梦的孩子

1. 收集细胞，生理盐水洗2次。PBS悬浮细胞，细胞浓度控制在1~9*10^6。" b  s' t  T  G& W% c' u- x0 I
2. 将抗体加入流式检测管中。: t( g6 _" n& i
3. 每管加入100ul 细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。
. E7 V; Y  f, J4 x0 e2 t4. 加入PBS缓冲液1ml清洗2次，300g离心5min。) v6 {! ?1 C1 `0 S7 W- f
5. 弃上清，加入500ml PBS重悬，然后上机。
0 C1 w- H5 V3 J  f6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

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学习一下，互相交流。