有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

yingfeixiang

回复 ych123 的帖子! U, {& P* {3 ?5 x$ z  e

/ O) E! G$ d0 g) S8 b) S5 r一般的5*10^5细胞就可以做出很好看的流式图，不知道你的方案是怎么设计的。

yingfeixiang

回复 ych123 的帖子1 u1 M1 w0 s: I/ w( `+ t
6 F- Z) i# @) Y; a; e' E- m! X1 j
细胞数肯定够做的了

ych123

回复 daviddow 的帖子
1 r, f2 h  k. U- s! p' ^( \8 B, \; s+ K- b/ _5 m! x) ~/ q
你有养过这个细胞的经历吗，求指导啊，我按照文献上面的来经常养出来都不纯，杂细胞很多

ych123

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" z- C8 i2 v6 w# F, A& d- v) C- U3 A- k
我是一个T25的瓶分为6管，一个对照，5个标记，后面上机老师说细胞数太少了，跑了一下就没跑了

zxd962735279

回复 ych123 的帖子5 x% y: N  [$ d5 ]3 u4 E
1 y  `, a1 j. q+ W3 t
我之前也出现这情况，因为细胞在最后一次洗细胞后重悬不充分导致的，不知道你是不是，

ych123

回复 zxd962735279 的帖子( b0 j$ ]( d: B! f* g# h- H

0 D) X1 h% Z0 e9 }% D" X! e重悬不充分，有可能哦，下次我注意点

yingfeixiang

回复 ych123 的帖子6 @# o; v( o2 T* w
# x& i7 q+ `' v
你做五管，细胞肯定够了，一个是在离心清洗时细胞丢失太多了，第二个就是最后重悬时没有做好，还在流式管底呢，可以振荡器振荡一小下

ych123

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+ s/ }6 Q' C9 R3 f$ [
  n, }' |- n0 d恩，应该做5管的，震荡过的

做梦的孩子

1. 收集细胞，生理盐水洗2次。PBS悬浮细胞，细胞浓度控制在1~9*10^6。
! t( Q1 {+ B' i2. 将抗体加入流式检测管中。( x& Z& H) u) e7 m3 }
3. 每管加入100ul 细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。8 m8 R9 k+ g/ C1 d
4. 加入PBS缓冲液1ml清洗2次，300g离心5min。! L% Y9 ^6 \/ B3 \' a
5. 弃上清，加入500ml PBS重悬，然后上机。
1 k! a% q5 F2 d" ~. j; `1 P( `4 C2 F6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

157238360jwj

学习一下，互相交流。