有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

ych123

有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，非常感谢，，，

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学习一下，互相交流。

做梦的孩子

1. 收集细胞，生理盐水洗2次。PBS悬浮细胞，细胞浓度控制在1~9*10^6。& e. t4 j3 K' h. Q
2. 将抗体加入流式检测管中。
6 n+ W. B7 R( U' M9 B; s7 U3. 每管加入100ul 细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。
+ y5 _8 U4 H+ R; Y( x6 @: B4. 加入PBS缓冲液1ml清洗2次，300g离心5min。8 E$ f# ]& r" x1 c8 J
5. 弃上清，加入500ml PBS重悬，然后上机。& @  g3 i: P6 m' ]9 @) ]
6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

ych123

回复 yingfeixiang 的帖子2 C  T$ }( m7 d* J4 {/ h

, x$ E  z; I# b恩，应该做5管的，震荡过的

yingfeixiang

回复 ych123 的帖子& G' o& y' E! j: U4 m; r
( q# B3 d+ Y- Z+ a; O( A1 I
你做五管，细胞肯定够了，一个是在离心清洗时细胞丢失太多了，第二个就是最后重悬时没有做好，还在流式管底呢，可以振荡器振荡一小下

ych123

回复 zxd962735279 的帖子
1 f7 _, x" L- j6 M
7 x" H3 l  ]7 A- X/ c0 [) a重悬不充分，有可能哦，下次我注意点

zxd962735279

回复 ych123 的帖子. ~5 R# o5 w. G+ i3 Q6 |9 L

6 ^* P/ a, R' |8 ]5 V/ j3 V我之前也出现这情况，因为细胞在最后一次洗细胞后重悬不充分导致的，不知道你是不是，

ych123

回复 yingfeixiang 的帖子3 ?9 u, K7 N! Q7 n8 _" v- @
5 `8 O* l6 E7 H/ c! o' n5 E
我是一个T25的瓶分为6管，一个对照，5个标记，后面上机老师说细胞数太少了，跑了一下就没跑了

ych123

回复 daviddow 的帖子# J; F% ?% r, Q' [. H& b

, y% n, m& s+ c& a你有养过这个细胞的经历吗，求指导啊，我按照文献上面的来经常养出来都不纯，杂细胞很多

yingfeixiang

回复 ych123 的帖子
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$ Q) H4 u6 c3 q& K( P0 P, b/ C细胞数肯定够做的了