有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，

ych123

有人有间充质干细胞流式细胞术上机前的实验步骤吗，，，，，，非常感谢，，，

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学习一下，互相交流。

做梦的孩子

1. 收集细胞，生理盐水洗2次。PBS悬浮细胞，细胞浓度控制在1~9*10^6。
1 P; b! A* V. {! z2. 将抗体加入流式检测管中。
, B9 p, h% u( h. C0 n3. 每管加入100ul 细胞悬液，与流式抗体混匀，4℃避光孵育30min。- P' X) z2 Z9 u4 q$ I, V: c
4. 加入PBS缓冲液1ml清洗2次，300g离心5min。4 [- s' y; T# n; N! j
5. 弃上清，加入500ml PBS重悬，然后上机。
. c( t5 f& T0 c( x: z6. 200目尼龙网过滤，准备上机检测。

ych123

回复 yingfeixiang 的帖子0 G$ E# T' T, Q3 F; e) G5 G; H
5 W5 n0 t& v! _3 @0 N
恩，应该做5管的，震荡过的

yingfeixiang

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" q* P: @- V/ z& h" D) L
- G) T# u4 R) p0 o你做五管，细胞肯定够了，一个是在离心清洗时细胞丢失太多了，第二个就是最后重悬时没有做好，还在流式管底呢，可以振荡器振荡一小下

ych123

回复 zxd962735279 的帖子5 W0 j! C3 G( ]; p% \7 a
8 o8 x9 D; I; G# Z/ z+ x
重悬不充分，有可能哦，下次我注意点

zxd962735279

回复 ych123 的帖子; p* A9 j' h9 }% _( b

6 s% L: x1 Y" ~2 g, \) G" _我之前也出现这情况，因为细胞在最后一次洗细胞后重悬不充分导致的，不知道你是不是，

ych123

回复 yingfeixiang 的帖子
5 i6 R. q/ d" R2 ~2 \8 T, k% r8 _- U/ T  H8 r+ E; O0 j
我是一个T25的瓶分为6管，一个对照，5个标记，后面上机老师说细胞数太少了，跑了一下就没跑了

ych123

回复 daviddow 的帖子, ]9 `0 E' x% k+ y/ q# p$ F( i* j

% {, t$ R( O% O, |  Q你有养过这个细胞的经历吗，求指导啊，我按照文献上面的来经常养出来都不纯，杂细胞很多

yingfeixiang

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- _1 u3 q2 C! F# D( l- z) `# T3 r" W
' f, q( O/ M0 N  n" g0 Z细胞数肯定够做的了